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目的:通过建立大鼠脊髓型颈椎病(CervicalSpondyloticMyelopathy,CSM)动物模型,用不同浓度剂量的补肾通络方灌胃治疗,观察其对CSM大鼠脊髓组织中IL-6、TNF-α及Bcl-2表达的影响,探讨补肾通络方抑制脊髓组织炎症反应、缓解神经元凋亡及促进神经功能恢复的作用机制。
方法:5周龄SD大鼠165只,正常对照组A不做任何处理,余大鼠均采用在颈椎间盘后缘注射骨形态发生蛋白(BMP)的方式建立大鼠CSM动物模型,模型建立后除去死亡及剔除试验者,余135只模型大鼠进入试验分组,并随机分为5组,即B、C、D、E、F组,每组27只,分别为模型组、补肾通络方高剂量组、补肾通络方中剂量组、补肾通络方低剂量组以及甲钴胺对照组。补肾通络方高、中、低剂量组分别按照16.74g/(kg·d)、8.37g/(kg·d)、4.19g/(kg·d)标准给药,甲钴胺对照组按大鼠每100g体重0.05mg标准给药,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃治疗,共给药4周。分别于给药后第1周、第2周、第4周,在处死大鼠前,进行改良Rivlin斜板实验,HE染色、炎性因子(IL-1β及TNF-α)及抗凋亡蛋白(Bcl-2)等相关指标的检测。
结果:1.改良Rivlin斜板实验结果显示:与A组相比,在给药前,B、C、D、E、F组斜板度数均明显减小,差异有统计学意义(P<0.05),表明模型建立良好。与F组相比,给药1周后,D组斜板度数明显增大,有统计学意义(P<0.05),C组、E组斜板度数减小,但没有统计学意义(P>0.05),给药2周后,C组、E组斜板度数均明显减小,有统计学意义(P<0.05),D组斜板度数增大,但没有统计学意义(P>0.05),给药4周后,C组斜板度数减小,D组斜板度数增大,但均没有统计学意义(P>0.05),E组斜板度数明显减小,有统计学意义(P<0.05)。每一组内,与给药前相比,给药4周后时,除A组差异无统计学意义(P>0.05),余组差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.IL-6含量结果显示:给药第1周、第2周、4周后,与B组相比,C、D、E、F组脊髓内IL-6含量均明显减小,有统计学意义(P<0.05);与F组相比,C组IL-6含量增大,D组含量减小,但均没有统计学意义(P>0.05),E组含量明显增大,有统计学意义(P<0.05)。每一组大鼠在不同时间点内,C、D、F组在给药4周后与1周后比较差异有统计学意义(P<0.05),余组无明显统计学差异(P>0.05)。
3.TNF-α含量结果显示:给药第1周、第2周、第4周后,与B组相比,C、D、E、F组TNF-α含量均明显减小,有统计学意义(P<0.05);与F组相比,C、E组TNF-α含量明显增大,有统计学意义(P<0.05),D组TNF-α含量含量减小,但没有统计学意义(P>0.05)。每一组内,与给药后第1周相比,给药后第4周时除A组差异无统计学意义(P>0.05),余组差异均有统计学意义(P<0.05)。
4.Bcl-2表达结果显示:给药第1、第2、第4周后,与B组相比,C、D、E、F组大鼠脊髓组织内Bcl-2表达均明显增大,有统计学意义(P<0.05);与F组相比,C组Bcl-2表达下降,D组上升,但均没有统计学意义(P>0.05),E组在给药2周后明显下降,有统计学意义(P<0.05),余时间点差异没有统计学意义(P>0.05)。每一组大鼠在不同时间点内,C、D、F组在给药第4周后与第1周后比较差异有统计学意义(P<0.05),余组无明显统计学差异(P>0.05)。
5.HE染色结果显示:C、D、E、F组较B组在第1周、第2周、第4周时均有不同程度的好转,脊髓组织细胞周围空隙减小,空泡结构有所恢复,总体恢复上来说,D组与F组作用相当,明显优于C组、E组。
结论:1.补肾通络方可显著降低CSM大鼠模型中脊髓组织中IL-6、TNF-α的含量,促进Bcl-2的表达,促进其神经功能的恢复,其机制可能与其能减少炎性细胞因子的分泌、抑制脊髓组织内炎症反应、减轻脊髓神经元的凋亡有关。
2.本研究发现补肾通络方中剂量组在CSM大鼠模型脊髓中的抗炎与抗凋亡作用,与与甲钴胺相当,但明显优于补肾通络方高、低剂量组。
方法:5周龄SD大鼠165只,正常对照组A不做任何处理,余大鼠均采用在颈椎间盘后缘注射骨形态发生蛋白(BMP)的方式建立大鼠CSM动物模型,模型建立后除去死亡及剔除试验者,余135只模型大鼠进入试验分组,并随机分为5组,即B、C、D、E、F组,每组27只,分别为模型组、补肾通络方高剂量组、补肾通络方中剂量组、补肾通络方低剂量组以及甲钴胺对照组。补肾通络方高、中、低剂量组分别按照16.74g/(kg·d)、8.37g/(kg·d)、4.19g/(kg·d)标准给药,甲钴胺对照组按大鼠每100g体重0.05mg标准给药,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃治疗,共给药4周。分别于给药后第1周、第2周、第4周,在处死大鼠前,进行改良Rivlin斜板实验,HE染色、炎性因子(IL-1β及TNF-α)及抗凋亡蛋白(Bcl-2)等相关指标的检测。
结果:1.改良Rivlin斜板实验结果显示:与A组相比,在给药前,B、C、D、E、F组斜板度数均明显减小,差异有统计学意义(P<0.05),表明模型建立良好。与F组相比,给药1周后,D组斜板度数明显增大,有统计学意义(P<0.05),C组、E组斜板度数减小,但没有统计学意义(P>0.05),给药2周后,C组、E组斜板度数均明显减小,有统计学意义(P<0.05),D组斜板度数增大,但没有统计学意义(P>0.05),给药4周后,C组斜板度数减小,D组斜板度数增大,但均没有统计学意义(P>0.05),E组斜板度数明显减小,有统计学意义(P<0.05)。每一组内,与给药前相比,给药4周后时,除A组差异无统计学意义(P>0.05),余组差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.IL-6含量结果显示:给药第1周、第2周、4周后,与B组相比,C、D、E、F组脊髓内IL-6含量均明显减小,有统计学意义(P<0.05);与F组相比,C组IL-6含量增大,D组含量减小,但均没有统计学意义(P>0.05),E组含量明显增大,有统计学意义(P<0.05)。每一组大鼠在不同时间点内,C、D、F组在给药4周后与1周后比较差异有统计学意义(P<0.05),余组无明显统计学差异(P>0.05)。
3.TNF-α含量结果显示:给药第1周、第2周、第4周后,与B组相比,C、D、E、F组TNF-α含量均明显减小,有统计学意义(P<0.05);与F组相比,C、E组TNF-α含量明显增大,有统计学意义(P<0.05),D组TNF-α含量含量减小,但没有统计学意义(P>0.05)。每一组内,与给药后第1周相比,给药后第4周时除A组差异无统计学意义(P>0.05),余组差异均有统计学意义(P<0.05)。
4.Bcl-2表达结果显示:给药第1、第2、第4周后,与B组相比,C、D、E、F组大鼠脊髓组织内Bcl-2表达均明显增大,有统计学意义(P<0.05);与F组相比,C组Bcl-2表达下降,D组上升,但均没有统计学意义(P>0.05),E组在给药2周后明显下降,有统计学意义(P<0.05),余时间点差异没有统计学意义(P>0.05)。每一组大鼠在不同时间点内,C、D、F组在给药第4周后与第1周后比较差异有统计学意义(P<0.05),余组无明显统计学差异(P>0.05)。
5.HE染色结果显示:C、D、E、F组较B组在第1周、第2周、第4周时均有不同程度的好转,脊髓组织细胞周围空隙减小,空泡结构有所恢复,总体恢复上来说,D组与F组作用相当,明显优于C组、E组。
结论:1.补肾通络方可显著降低CSM大鼠模型中脊髓组织中IL-6、TNF-α的含量,促进Bcl-2的表达,促进其神经功能的恢复,其机制可能与其能减少炎性细胞因子的分泌、抑制脊髓组织内炎症反应、减轻脊髓神经元的凋亡有关。
2.本研究发现补肾通络方中剂量组在CSM大鼠模型脊髓中的抗炎与抗凋亡作用,与与甲钴胺相当,但明显优于补肾通络方高、低剂量组。