【摘 要】
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目的：制备超顺磁性壳聚糖质粒明胶微球（SPCPGM），在体外研究不同磁场强度、不同频率的脉冲振荡磁场作用下，与质粒（pDsVEGF165Red1-N1）基因释放的量效关系。初步在体内进行活性实验研究，为超顺磁性明胶载药微球的体内研究及临床应用提供实验依据。方法：（1）用化学共沉淀法制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒（SPFCN），用透射电镜、X-射线衍射仪、Zeta电位分析仪和振动样品磁场计等对制
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目的：制备超顺磁性壳聚糖质粒明胶微球（SPCPGM），在体外研究不同磁场强度、不同频率的脉冲振荡磁场作用下，与质粒（pDsVEGF165Red1-N1）基因释放的量效关系。初步在体内进行活性实验研究，为超顺磁性明胶载药微球的体内研究及临床应用提供实验依据。
方法：（1）用化学共沉淀法制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒（SPFCN），用透射电镜、X-射线衍射仪、Zeta电位分析仪和振动样品磁场计等对制备的SPFCN进行形态观察和结构表征。（2）制备大量能够在真核细胞中表达人VEGF165的质粒（pDsVEGF165Red1-N1）。对质粒进行DNA序列测定，用SmartSpecTM3000核酸蛋白测定仪测定其浓度。（3）制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒质粒（pDsVEGF165Red1-N1）复合物。（4）用交联固化法制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖质粒明胶微球（SPCPGM）和超顺磁性壳聚糖明胶微球（SPCGM）。用纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨水泥（由四川大学纳米生物材料研究中心提供）制备中空带侧孔的仿兔桡骨中段骨缺损修复支架。将一定量的两种微球分为（A组）SPCPGM+振荡磁场，（B组）非磁性的SPCPGM+振荡磁场，（C组）SPCGM+中空支架+振荡磁场，其中A组和B组的微球包于双层纱布中，C组的微球装于支架中；在37℃下，用溶出度测定仪的转蓝法测质粒的释放度，采用模拟人工体液（pH7.4）介质进行体外药物释放试验，用核酸蛋白测定仪测定质粒的释放量。（5）选用新西兰大白兔48只，建立兔桡骨双侧骨缺损模型，随机分为（A组）SPCPGM+中空支架+振荡磁场，（B组）SPCPGM+中空支架，（C组）SPCGM+中空支架+振荡磁场；术后2周、4周、6周、8周、12周，搜集标本，通过大体观察，生血管情况进行定性及定量测定，以评估三种不同处理组促进新生血管的情况。
结果：（1）透射电镜下Fe3O4纳米粒外形呈圆形或椭圆形，均匀度好，粒径小于30nm；氮含量为0.0058mg/L。SPFCN表面带正电荷（69.8±5.1mV）。振动样品磁场计结果显示：SPFCN具有超顺磁性。（2）质粒（pDsVEGF165Red1-N1）经扩增、纯化后，用琼脂糖凝胶电泳分析鉴定显示：VEGF165片段大小与预期的相符，基因序列测定结果表明，基因序列正确。用SmartSpecTM3000核酸蛋白测定仪检测质粒浓度为0.28±0.05 mg/ml。（3）复合后的SPCPN Zeta电位为26.7±4mV，仍带正电荷。（4）振荡磁场下SPCPGM体外质粒释放实验显示：SPCPGM具有药物缓释功能，释药时间超过三周。振荡磁场能够促进SPCPGM质粒释放的速率，25天时使药物释放量提高到3倍。
结论：振动磁场下SPCPGM促进人工骨血管化的体内实验研究表明：①SPCPGM具有促进体内局部成血管及成骨作用，而SPCGM几乎没有这个作用。②振动磁场的应用，能够明显提高SPCPGM体内局部成血管及成骨的作用，4周时成血管量达到最高峰，6周有大量的骨长成。③促进血管生成及成骨的效能依次为：SPCPGM+中空支架+振荡磁场>SPCPGM+中空支架>SPCGM+中空支架+振荡磁场。
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