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目的: 黄芩是最常用的清热解毒中药之一，其主要有效成分为黄酮类化合物，尤其是其中的黄芩素、黄芩苷、汉黄芩素、汉黄芩苷，已被证明具有广泛的药理活性。为了进一步阐明黄芩药效的物质基础和作用机理，本研究对黄芩的黄酮类单体黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素成分进行了免疫抑制活性作用的筛选研究，并主要针对汉黄芩苷进行全面深入的免疫抑制活性及作用机理的探讨。 方法: (1)运用丝裂原(ConA、LPS)或anti-CD3抗体诱导的T/B淋巴细胞活化和增殖反应体系中观察黄芩素、黄芩苷、汉黄芩素、汉黄芩苷的免疫抑制活性; (2)采用AnnexinⅤ/PI染色法结合流式细胞术分析汉黄芩苷对anti-CD3抗体刺激的小鼠脾脏淋巴细胞凋亡水平的影响作用; (3)ELISA法检测汉黄芩苷对anti-CD3抗体诱导的小鼠脾脏淋巴细胞分泌Th1、Th2和Th17型细胞因子水平的影响; (4)运用实时定量RT-PCR法检测汉黄芩苷对anti-CD3抗体诱导的小鼠脾脏淋巴细胞Th1及Th17型转录因子表达水平的影响作用; (5)运用Western Blot法检测汉黄芩苷对anti-CD3抗体诱导的小鼠脾脏淋巴细胞MAPK/NF-κB通路信号蛋白活化水平的影响作用; (6)采用卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠抗原特异性免疫反应，评价灌胃给药汉黄芩苷的体内免疫抑制活性作用，包括对抗原(OVA)特异性淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌水平的影响作用; (7)ELISA法检测灌胃给药汉黄芩苷对OVA免疫的小鼠血清特异性抗体分泌水平的影响作用; (8)流式细胞术分析灌胃给药汉黄芩苷对OVA免疫的小鼠脾脏淋巴细胞活化程度及Th1、Th17及Treg分群的影响作用。 结果: (1)汉黄芩苷和汉黄芩素在无明显细胞毒的浓度范围内对小鼠脾脏淋巴细胞活化具有显著免疫抑制活性，且汉黄芩苷的免疫抑制活性强于汉黄芩素，可浓度依赖性地抑制丝裂原及anti-CD3抗体诱导的T淋巴细胞和B淋巴细胞活化增殖; (2)汉黄芩苷可促进活化的小鼠脾脏淋巴细胞进入凋亡; (3)汉黄芩苷可浓度依赖性地抑制anti-CD3抗体诱导的小鼠脾脏淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-17，并降低Th1及Th17分化转录因子T-bet及ROR-γt的表达水平; (4)汉黄芩苷可抑制anti-CD3抗体诱导的小鼠脾脏淋巴细胞MAPK/NF-κB炎症通路信号转导分子的磷酸化; (5)灌胃给药汉黄芩苷能够抑制OVA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞抗原特异性免疫应答反应，包括抑制抗原特异性淋巴细胞/T细胞增殖及降低炎性细胞因子分泌水平，但对于小鼠血清特异性抗体的分泌无显著影响作用;汉黄芩苷可显著降低OVA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞中Th1及Th17型细胞的比例，减少CD44+CD62L-表型的效应性CD4+T细胞数量，但对调节性Treg细胞比例无显著影响作用。 结论: 研究证实了汉黄芩苷具有优于黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素的免疫抑制活性，汉黄芩苷具有良好的生物学效应（生物活性选择指数）。体外，汉黄芩苷对于丝裂原及特异性抗体信号介导的淋巴细胞增殖效应及细胞因子分泌具有显著抑制作用，并在转录水平对Th1及Th17型细胞分化产生一定阻断作用，同时对于MAPK/NF-κB炎症信号通路产生抑制作用;体内，灌胃给药汉黄芩苷对于OVA抗原诱导的小鼠抗原特异性免疫应答具有显著的抑制作用，包括OVA特异性的淋巴细胞/T细胞增殖效应、炎性细胞因子分泌以及Th1及Th17型细胞的分化，并减少脾脏中活化的Th细胞表型，初步阐释了汉黄芩苷通过抑制抗原诱导的淋巴细胞活化，限制Th1及Th17型细胞的分化，减少炎性细胞因子的产生，从而发挥其免疫抑制活性的作用机制，提示汉黄芩苷具有治疗包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等在内的自身抗体介导的自身免疫性疾病的潜在应用前景。