论文部分内容阅读
背景与目的
原发性肝癌（PrimaryLiverCancer，PLC）是我国最常见恶性肿瘤之一，肝细胞肝癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC）是其主要类型，约占91%。尽管近年来对HCC的早期筛查、外科诊疗及生物靶向治疗等有所进展，但HCC的5年生存率和手术切除率没有明显改善，造成HCC疗效不佳的主要原因是早期转移和极易复发。
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)是癌症的侵袭转移过程中的一个重要环节，也是目前HCC复发转移的研究热点之一。肿瘤细胞发生EMT后，细胞从原锚定位点脱离，从而向远处转移；发生EMT过程的标志是不同钙粘蛋白之间的转换，并伴随着其他相关蛋白和转录因子的变化。
Nogo-B（RTN4-B）作为一种内质网跨膜蛋白，广泛分布于外周组织，参与众多组织器官的生理病理过程。Nogo-B可以参与血管的损伤修复以及肝纤维化的调节恢复。而近年来的研究发现，在HCC、乳腺癌等实体肿瘤中，Nogo-B及其受体存在有异常表达，并可能通过不同的分子机制参与控制细胞凋亡、侵袭、转移等过程。
细胞外信号调节激酶（Extracellularsignal-RegulatedKinases，ERK）作为丝裂原活化蛋白激酶（MitogenActivatedProteinKinases，MAPK）的一员，能通过二聚体化及磷酸化转移至细胞核内，调控细胞的生长和分化。胞质中的下游信号分子如SOS、磷酸化后的MKP（MAP激酶磷酸酶）等也可负反馈调节ERK。
到目前为止，尚未见关于Nogo-B参与HCC的EMT过程以及分子机制的研究报道。本实验提出Nogo-B促进HCC细胞的EMT过程的研究假设，并尝试进一步揭示Nogo-B促进HCC细胞的EMT的分子机制。
材料与方法
1.获取人临床HCC组织标本和相应的癌旁组织30对、肝癌细胞株和人正常肝细胞株，分别检测Nogo-B的表达水平。2.构建Nogo-B过表达的Hep3B细胞和对照的3B细胞的迁移功能进行对比。接着检测转染siRNA后的3B细胞EMT标志物和ERK信号通路分子的表达变化。研究所用方法主要有蛋白免疫印迹、定量PCR、划痕愈合试验及Transwell试验。3.最后用特异性ERK抑制剂中断信号转导轴，观察3B细胞功能的变化情况。
结果
（1）HCC组织、肝癌细胞株Hep3B、HepG2、SMMC7721、Huh-7中Nogo-B的表达水平皆高于配对的癌旁组织以及人正常肝细胞L02（p值均小于0.01）。
（2）Nogo-B过表达的Hep3B细胞迁移能力强于对照组，而转染siRNA后，细胞的迁移能力明显下降（p值均小于0.05）。
（3）Nogo-B过表达的Hep3B细胞内E-钙粘蛋白表达显著低于正常3B细胞，波形蛋白及Slug则明显高于后者。转染siRNA干扰Nogo-B表达后的肝癌细胞呈现出相反的结果。
（4）Nogo-B过表达的3B细胞的ERK信号分子表达水平明显升高，以特异性ERK抑制剂处理后，Hep3B细胞迁移能力明显下降（p值均小于0.05）。
结论
Nogo-B在HCC组织和细胞株中过表达，其可能通过ERK信号转导通路，促进HCC的EMT过程，最终导致肿瘤细胞侵袭和迁移。
原发性肝癌（PrimaryLiverCancer，PLC）是我国最常见恶性肿瘤之一，肝细胞肝癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC）是其主要类型，约占91%。尽管近年来对HCC的早期筛查、外科诊疗及生物靶向治疗等有所进展，但HCC的5年生存率和手术切除率没有明显改善，造成HCC疗效不佳的主要原因是早期转移和极易复发。
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)是癌症的侵袭转移过程中的一个重要环节，也是目前HCC复发转移的研究热点之一。肿瘤细胞发生EMT后，细胞从原锚定位点脱离，从而向远处转移；发生EMT过程的标志是不同钙粘蛋白之间的转换，并伴随着其他相关蛋白和转录因子的变化。
Nogo-B（RTN4-B）作为一种内质网跨膜蛋白，广泛分布于外周组织，参与众多组织器官的生理病理过程。Nogo-B可以参与血管的损伤修复以及肝纤维化的调节恢复。而近年来的研究发现，在HCC、乳腺癌等实体肿瘤中，Nogo-B及其受体存在有异常表达，并可能通过不同的分子机制参与控制细胞凋亡、侵袭、转移等过程。
细胞外信号调节激酶（Extracellularsignal-RegulatedKinases，ERK）作为丝裂原活化蛋白激酶（MitogenActivatedProteinKinases，MAPK）的一员，能通过二聚体化及磷酸化转移至细胞核内，调控细胞的生长和分化。胞质中的下游信号分子如SOS、磷酸化后的MKP（MAP激酶磷酸酶）等也可负反馈调节ERK。
到目前为止，尚未见关于Nogo-B参与HCC的EMT过程以及分子机制的研究报道。本实验提出Nogo-B促进HCC细胞的EMT过程的研究假设，并尝试进一步揭示Nogo-B促进HCC细胞的EMT的分子机制。
材料与方法
1.获取人临床HCC组织标本和相应的癌旁组织30对、肝癌细胞株和人正常肝细胞株，分别检测Nogo-B的表达水平。2.构建Nogo-B过表达的Hep3B细胞和对照的3B细胞的迁移功能进行对比。接着检测转染siRNA后的3B细胞EMT标志物和ERK信号通路分子的表达变化。研究所用方法主要有蛋白免疫印迹、定量PCR、划痕愈合试验及Transwell试验。3.最后用特异性ERK抑制剂中断信号转导轴，观察3B细胞功能的变化情况。
结果
（1）HCC组织、肝癌细胞株Hep3B、HepG2、SMMC7721、Huh-7中Nogo-B的表达水平皆高于配对的癌旁组织以及人正常肝细胞L02（p值均小于0.01）。
（2）Nogo-B过表达的Hep3B细胞迁移能力强于对照组，而转染siRNA后，细胞的迁移能力明显下降（p值均小于0.05）。
（3）Nogo-B过表达的Hep3B细胞内E-钙粘蛋白表达显著低于正常3B细胞，波形蛋白及Slug则明显高于后者。转染siRNA干扰Nogo-B表达后的肝癌细胞呈现出相反的结果。
（4）Nogo-B过表达的3B细胞的ERK信号分子表达水平明显升高，以特异性ERK抑制剂处理后，Hep3B细胞迁移能力明显下降（p值均小于0.05）。
结论
Nogo-B在HCC组织和细胞株中过表达，其可能通过ERK信号转导通路，促进HCC的EMT过程，最终导致肿瘤细胞侵袭和迁移。