组蛋白变体macroH2A分子伴侣的筛选

来源 :北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:simwwx
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真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在于细胞核中。核小体是染色质的结构单元,由147 bp DNA缠绕组蛋白八聚体组成。组蛋白变体作为重要的表观遗传调控因子,可以调控基因组相关的生物学功能。  MacroH2A是常规组蛋白H2A的变体,它具有特殊的macro domain,分子量是其它组蛋白的三倍。MacroH2A的功能多与基因沉默有关,在X染色体失活、胚胎发育、肿瘤发生中发挥了重要作用。组蛋白分子伴侣可以与组蛋白结合,促进组蛋白转移,但不参与构成终产物。组蛋白分子伴侣参与了组蛋白合成、加工、转运、贮存、代谢,是组蛋白发挥功能的重要条件。以往对macroH2A的研究大多集中于其的生物学功能,而对其分子伴侣所知甚少。  我们采用筛选组蛋白分子伴侣经典方法:串联亲和纯化(TAP)技术,在细胞核提取物(nuclear extracts,NE)中验证可能的分子伴侣Y与H2A-H2B存在相互结合作用。  本实验采用同样的方法筛选组蛋白变体macroH2A的分子伴侣。利用稳定表达macroH2A的HEK293T细胞制备的NE中存在大量染色质污染。我们改用染色质结构更稳定的HeLa S3细胞执行上述操作,得到了同样的结果。我们推测这种现象可能与macro domain有关。我们选取了不含有macro domain同时又能顺利入核形成完整核小体的macroH2A删截体进行实验,仍无改善。我们从胞质提取物(cytosolicextracts,CE)中筛选多个macroH2A可能分子伴侣,可能与macroH2A加工、转运入核有关。  综上所述,本人用经验证有效的TAP方法从胞质提取物中筛选出多个macroH2A可能分子伴侣。在从NE中筛选macroH2A分子伴侣的过程中优化了TAP方法。
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