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空肠弯曲菌(CJ)为常见的人兽共患病原菌,是全球性引起胃肠道感染细菌性肠炎最常见的食源性病原体之一。该菌广泛存在于家禽类动物的肠道中,污染水源或食物后可引起腹泻的暴发流行,对成人,小儿可引起急性胃肠炎,也可导致心内膜炎、关节炎、败血症和血栓静脉等全身性疾病,空弯菌感染病人常并发反应性格林巴利综合征等自身免疫病特征的疾病,但其机理不明。以往许多关于CJ抗原结构及分类的研究已积累了大量的相关资料。有实验表明,CJ的菌体蛋白和LPS抗原均在引起自身免疫反应的神经性疾患的发生过程中具有重要意义。同时,CJ的鞭毛抗原亦有可能参与某些神经性疾患的病理过程。
本实验的研究重点是对CJ的鞭毛抗原FlaA蛋白进行人工表达及免疫原性的分析,从基因技术制备CJ的重组抗原的这一基本方法入手,对CJ的主要鞭毛抗原进行相应的免疫学分析。经GenBank检索CJ的flaA编码区基因长1.7Kbp。使用PCR方法获得flaA编码的基因,经确证后将该基因克隆到谷胱甘肽转移酶融合表达载体(pGEX-5x-1)中,构建了pGEX-flaA表达质粒,在大肠杆菌BL21中获得了相应表达,并采用GlutathioneSepharose4B进行纯化后获得目的蛋白,用该蛋白免疫小鼠制备了特异性抗血清,利用经培养获得CJ菌体的裂解液做为抗原,通过用最基本的免疫凝集及免疫扩散方法对该抗血清进行初步的分析,结果表明,无论是在显微镜下的免疫凝集现象及琼脂扩散分析的抗原—抗体凝集条带,都证明了所获得的抗血清为针对CJ抗原的特异性抗体。这意味着本文利用基因克隆—原核表达所获得FlaA融合蛋白是具有相应的免疫原性的。