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由于缺少有效的治疗手段，乙型肝炎病毒(hepatitis B，HBV)感染仍旧严重威胁着人类的生命健康。据世界卫生组织统计，全球有近2.4亿慢性乙肝(chronichepatitis B，CHB)患者，其中每年约有100万人死于HBV所导致的慢性感染。所以研究HBV，特别是HBV慢性感染的治疗策略具有十分重要的现实意义。 HBV只能感染人和高等的灵长类动物，动物模型的缺乏限制了HBV致病机理及其治疗策略的研究。为了更好地研究CHB的治疗策略，我们通过尾静脉注射AAV-HBV1.3病毒的方式，成功在C57BL/6野生小鼠和HLA-A2.1转基因小鼠中，构建了稳定的HBV耐受小鼠模型，该模型具有和CHB患者相同的临床表症。感染后，耐受小鼠血清中有持续的HBsAg，HBeAg以及preS1抗原表达，并且其维持时间在六个月以上;同时小鼠血清中能够检测到较高水平HBV-DNA滴度;而且该模型没有ALT/AST升高，表明在病毒感染时没有诱导肝脏损伤。以AAV-HBV1.3感染的小鼠作为研究模型，我们发现HBV的包膜蛋白存在着不同的耐受状态。在HBV耐受过程中，包膜蛋白HBsAg是一个主要的耐受原，血清中大量游离的由HBsAg组成的假病毒颗粒被认为是诱导耐受的重要原因。但是不同于HBsAg，HBV的包膜蛋白preS1具有更低的血清学水平;而且preS1更偏向存在于完整HBV病毒表面，同血清中HBV-DNA具有更好的相关性。preS1的这些特性提示我们其可能具有更强的免疫原性以及更弱的耐受性。我们单独以preS1作为疫苗，在联合合适的佐剂的情况下，能够在HBV耐受模型中诱导强烈的特异性preS1抗体应答和T细胞免疫应答。产生的preS1抗体能够完全清除血清中preS1抗原，并且部分降低HBsAg水平。通过荧光定量PCR(qPCR)检测血清中HBV-DNA，表明anti-preS1能够有效地清除感染模型外周的感染性HBV病毒。另外，由于外周HBV不能再次感染小鼠肝脏细胞，我们通过HepG2-hNTCP体外感染实验验证了anti-preS1能够阻断HBV对肝细胞的感染。这些结果表明preS1在HBV慢性感染中不耐受，并能作为治疗性疫苗。 与此同时，我们发现preS1免疫能够明显降低HBsAg滴度，实验表明preS1疫苗免疫能够帮助恢复HBsAg的免疫反应。受此启发，我们联合preS1与HBsAg作为一种新型的治疗策略，在HBV耐受模型中免疫preS1疫苗，当preS1抗原被清除并且降低HBsAg后，再免疫HBsAg疫苗。这种有序的治疗策略能够最终清除HBsAg，并诱导HBsAg-HBsAb的血清学转化。通过qPCR和RT-qPCR检测，我们发现肝脏中HBV相关DNA和RNA得到明显的清除。免疫组化检测HBcAg阳性的肝脏细胞也表明，联合preS1和HBsAg的治疗策略能够清除肝脏中HBV。