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胃癌(gastric cancer,GC)源自于胃黏膜上皮细胞,是一种常见的消化道恶性肿瘤,其恶性程度高,发病率、病死率较高,我国胃癌5年相对生存率在最近的调查中显示仅有27.4%,而早期胃癌术后的生存率却高达90%以上,故而早期发现、早期治疗显得十分重要。随着分子生物学和基因技术的发展、提高,众多学者开始从基因水平来研究胃癌,试图寻找胃癌可靠的诊断标志物及新的治疗靶点。半乳糖血凝素-3蛋白(Galectin-3)属于半乳糖凝集素家族的成员,参与了包括调节细胞的生长分化、细胞的黏附凋亡和血管形成等诸多人体多种生理及和病理过程,还被发现参与肿瘤细胞的侵袭和转移。Galectin-3蛋白在不同来源的肿瘤组中的表达情况结论不同,目前认为其是与胃癌发展关系比较密切的基因。近年有关研究均显示,Galectin-3在胃癌组织中阳性表达率较高,Galectin-3的沉默可以导致肿瘤细胞形态的改变,降低细胞活力,减少恶性细胞侵袭,而过度表达逆转了这些效应,促进胃癌的转移。Galectin-3的表达与胃癌的分化程度、转移潜能有密切关系,可能成为预防和治疗胃癌进展、转移的潜在靶点。CD105蛋白为血管内皮细胞增殖的标志物,它是一种同型二聚体的细胞膜糖蛋白,通过调节转化生长因子β(Transforming growth factorβ,TGF-β),进行内皮-间质的信号传递,参与血管的形成以及肿瘤的发生发展、浸润及转移,可被认为成肿瘤抗血管生成治疗中较理想的分子靶点。相比于之前发现的泛血管内皮标记因子,CD105蛋白能够更加准确地反映出细胞的增殖状态。公认为肿瘤微血管形成重要标志的微血管计数(MVD)可以准确的反映CD105的表达情况。CD105在卵巢癌、大肠癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤及心血管疾病中的研究较多,但在胃癌方面的研究目前仍甚少。目的:研究Galectin-3和CD105在胃癌不同时期的表达情况,并探讨两种蛋白表达的相关性。方法:1.收集经内镜黏膜下剥离术(ESD)内镜下切除、切缘阴性且经病理科医师确诊为早期胃癌的患者标本30例,同时收集胃切除术后病理科医师确诊为进展期胃癌的患者标本30例,作为实验组。对照组为胃癌旁正常组织30例。2.应用免疫组织化学染色技术检测各组患者胃组织中CD105蛋白(以MVD反映CD105的表达)和Galectin-3蛋白的表达。采用文献报道的Galectin-3阳性率计算方法分析各组光密度值(OD)及表达的阳性率,采用Weidner方法对CD105-MVD进行量化分析。采用SPSS 21.0软件包进行统计学处理,P<0.05差别有统计学意义。计数资料用率(%)表示,采用χ2分析;2组间的比较采用t检验,3组以上的比较采用方差分析;相关分析用Spearman检验。检验水准α=0.05。结果:1.病例资料HE染色:细胞核为紫蓝色,细胞浆、胶原纤维及基底膜为粉红色。观察所取的癌旁正常组织、早期胃癌组织及进展期胃癌组织的镜下情况,癌旁正常组织胃黏膜上皮结构完整连续,腺体细胞排列整齐。早癌细胞核增大、深染,细胞多形性和核突显,腺体复杂出芽或分支形成等。进展期瘤细胞核增大、深染,细胞多形性和核突显,异型腺体浸润至黏膜下层至黏膜肌层甚至全层。2.Galectin-3蛋白表达检测结果Galectin-3蛋白经过免疫组织化学染色后,染色阳性呈浅棕至深棕色颗粒,主要表达于上皮细胞的细胞浆及胞核。胃癌旁正常黏膜组织(图2A)Galectin-3呈浅棕色表达,而早期胃癌ESD组织(图2B)和进展期胃癌组织(图2C)中呈棕色或深棕色,且表达量较对照组增多。统计学分析Galectin-3表达的平均光密度值(optical density,OD)(图4)为进展期组(0.312±0.101)>早癌组(0.224±0.063)>对照组(0.176±0.439),胃癌(0.259±0.090)>对照组(0.176±0.439),任意两组比较均得出P<0.05,差别有统计学意义。对应三组Galectin-3蛋白表达阳性率依次分别是20.00%(6/30)、46.67%(14/30)及66.67%(20/30),总胃癌表达阳性率58.3%,三者间差异均有统计学意义(P<0.05)(表2-3)。3.MVD的计数结果CD105蛋白染色阳性为棕黄色颗粒,主要位于上皮新生血管内皮细胞的细胞浆。CD105蛋白呈阳性表达的血管多为管径较小、新生薄壁的血管,厚壁的大血管均未见表达。胃癌旁正常黏膜组织中未见CD105蛋白的表达(图3A),MVD为0;早期胃癌ESD组织(图3B)的MVD为(28.933±2.891)个/HP,进展期胃癌(图3C)的MVD为(34.750±6.017)个/HP,三者间差异均有统计学意义(P<0.05)(表2-3)。4.Galectin-3蛋白表达与MVD的相关性胃癌组织中Galectin-3蛋白的表达和MVD与肿瘤的进展过程关系密切。从早期胃癌到进展期胃癌,Galectin-3蛋白表达阳性率逐渐升高,同时CD105-MVD也逐渐升高。早期胃癌组(r=0.480,P<0.05)、进展期胃癌组(r=0.532,P<0.05)中两者间均呈正相关(表4-5)。结论:1.Galectin-3蛋白、CD105蛋白在胃癌组织的表达明显高于正常组织,可成为胃癌诊断可靠分子指标;在进展期胃癌的表达高于早期胃癌及正常黏膜组织,与胃癌的临床分期、进展程度有一定的关系;联合检测可能作为提高胃癌的诊断率、预测胃癌进展程度的潜在敏感指标。2.相关性分析表明,Galectin-3与CD105-MVD在胃癌进展中的表达呈正相关,Galectin-3可能促进了胃癌的微血管增生,为胃癌抗血管治疗提供新的靶点及思路。