【摘 要】
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目的:研究COX-2在活化的肝星状细胞中的表达,探讨COX-2与脂代谢关键基因ACC、HMGCR、CPT1a在活化的肝星状细胞中作用的相互关系。构建COX-2的shRNA,检测其在大鼠肝星状细胞HS
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目的:研究COX-2在活化的肝星状细胞中的表达,探讨COX-2与脂代谢关键基因ACC、HMGCR、CPT1a在活化的肝星状细胞中作用的相互关系。构建COX-2的shRNA,检测其在大鼠肝星状细胞HSC-T6中对COX-2基因表达的抑制作用,以及敲低COX-2的表达后,观察COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a的表达变化,以及细胞内的甘油三脂、胆固醇、维生素A的含量变化,并进一步探讨COX-2在肝纤维化的作用机制。方法:取肝星状细胞HSC-T6为研究对象。实验分为6组:第一组为shRNA序列1组;第二组为shRNA序列2组;第三组为shRNA序列3组;第四组为阴性对照组;第五组尼美舒利药物组;第六组为空载体组。第一组至第第三组为活化的肝星状细胞中加入靶向COX-2基因的shRNA最佳剂量分别转染24小时、48小时、72小时。用RT-PCR法检测每组肝星状细胞转染后COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a水平的mRNA表达;高效液相色谱法(HPLC)检测每组细胞内甘油三酯、胆固醇、维生素A的含量,从而确定靶向COX-2基因的shRNA沉默COX-2基因后对肝星状细胞脂代谢影响的时效关系。实验数据以±s表示,用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析,以P﹤0.05作为差异显著性标准。结果:加入靶向COX-2基因的shRNA最佳剂量分别转染24小时、48小时、72小时,结果显示:靶向COX-2基因的shRNA可有效敲低COX-2mRNA的表达,同时呈时间依赖性的减少HMGCR、CPT1的mRNA表达、增加ACC的mRNA表达。选择性COX-2抑制剂有同样的效果,但是转染组与药物组比较差异无明显统计学意义。HPLC结果显示:细胞内甘油三酯含量、维生素A呈时间依赖性增加;胆固醇呈时间依赖性减少。结论:1、COX-2可促进HMGCR、CPT1的表达,抑制ACC的表达。2、COX-2的表达被沉默后,可使HSC脂滴内的脂肪含量增加,HSC有可能重新脂肪化。
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