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人细小病毒B19 (human parvovirus B19)是目前发现的细小病毒科中仅有的两种(另一种为博卡病毒)使人类致病的病毒之一,在全世界广泛分布。许多研究结果表明,B19病毒可感染各个年龄段的人群,但临床症状各不相同。本实验室研究发现,武汉地区普通人群的感染率约为4.50%,而育龄期妇女则高达8.50%。B19病毒显示出的对原红细胞的趋向性,使其只能在来自于骨髓的红细胞,婴儿肝细胞或像UT7/EPO这样的细胞中复制,然而,也有研究表明,在腺病毒的帮助下,B19病毒也可以在非允许细胞如293细胞系中进行复制并产生有感染性的子代病毒粒子。最近,Chun Wang等发现,B19病毒可以在肝组织细胞中长期存在,在感染HCV病人的体内经常能检测到B19病毒的存在。由于B19病毒对人致病的广泛性和复杂性,目前国际上对该病毒的研究日趋活跃,尤其对非结构蛋白NS1的功能和作用机理的报道较多,而对x蛋白质和11kD非结构蛋白的研究则很少。本课题主要分为两个部分：第一部分主要是将B19病毒的X基因克隆到pET-28a载体上,经IPTG诱导表达了目的蛋白,纯化并制备了相应的抗体。同时,实验还将x基因片段插入带有绿色荧光蛋白GFP报告基因的pEGFP-N1表达载体中,构建pEGFP-N1-X融合表达载体,观察X蛋白质在宿主细胞中的定位,实验结果显示融合蛋白在宿主细胞的细胞核和细胞质中均有分布。这些实验结果为进一步研究该蛋白质的生物学功能奠定了一定的基础。第二部分主要是通过定点突变构建缺失11KD的感染性克隆来研究11kD蛋白质在病毒感染中的作用,实验还分别通过构建原核表达载体pET-49b-11和真核表达载体pcDNA3.1-Grb2,并通过western blot检测两种融合蛋白GST-11、HA-Grb2的表达情况为后续的GST PULL DOWN实验打下基础。另外,实验还定点突变了11KD蛋白质富含脯氨酸区段的关键氨基酸,为研究11KD蛋白质在病毒感染中的作用奠定了初步的基础。