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目的:1、制备ICSII纳米脂质体;2、建立LC-MS方法测定大鼠血浆及组织中ICSII浓度;3、明确ICSII纳米脂质体在大鼠体内的药代动力学和组织分布行为。方法:1、采用Sephadex LH-20-微柱离心-高效液相方法测定ICSII纳米脂质体包封率。通过对离心次数、游离药物干扰试验进行考察,筛选ICSII纳米脂质体包封率测定的方法。ICSII纳米脂质体经Sephadex LH-20微柱吸附后在相对离心力45 g,PBS离心洗脱7次的条件下可使纳米脂质体与游离药物分离。方法学考察表明专属性良好,在0.01-0.35 mg/m L范围内呈良好线性关系(R2>0.999);重复性良好,日内精密度及日间精密度均RSD不大于2.00%,游离药物回收率98.86%,游离药物对脂质体的测定几乎不干扰。采用薄膜分散-超声法制备ICSII纳米脂质体,并对制备工艺进行单因素初步优化。2、采用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS)方法测定ICSII纳米脂质体在大鼠血浆中ICSII的浓度。血浆样品采用乙酸乙酯萃取,室温氮气吹干,甲醇复溶后进样,以淫羊藿次苷Ⅰ为内标,色谱条件为:Gemini-Nx3μC18 110A Phenomenex色谱柱(150×3.0 mm,3μm),流动相为0.25%甲酸水和0.25%甲酸乙腈,流速0.5 mL/min,进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应离子监测(MRM)进行扫描,定量离子对为m/z 515.2/313.2(ICSII)和m/z 531.2/313.2(IS)。ICSII在大鼠血浆中的线性范围为:3.80-760.00 ng/mL,R2>0.990;日内、日间精密度的RSD均不大于8.39%,准确度在±6.91%之间;提取回收率在84.98%~98.55%之间,RSD不大于8.44%;长期稳定性(4周)RSD值不大于11.25%;反复冻融(3次)稳定性RSD值不大于5.19%;所建方法快速、灵敏、重复性好。12只SD大鼠,随机分两组,分别尾静脉注射5 mg/kg的ICSII混悬液和纳米脂质体,lc-ms测定不同时间点血药浓度,采用das3.2.8计算药代动力学参数。3、组织分布实验首先在与血浆样品相同的处理方法及测定条件基础上,建立lc-ms方法测定组织中icsii的方法,icsii在大鼠组织中线性范围为:3.83-766.00ng/ml,r2>0.99,日内、日间精密度rsd不大于9.75%,准确度在±9.31%以内;提取回收率在84.95%-97.6%之间,rsd不大于10.05%。方法快速、灵敏、重复性好。72只sd大鼠,随机分两个大组(icsii混悬液组,和icsii纳米脂质体组)12个小组,分别尾静脉注射5mg/kg的icsii混悬液和纳米脂质体后,颈椎脱臼处死,取心、肝、脾、肺、肾,采用已建立lc-ms方法测定药物在组织中的浓度。das3.2.8计算各组织药动学参数。结果:1、脂质体最优制备工艺为icsii:磷脂:胆固醇=1:20:5(w:w:w),甲醇:0.5ml,氯仿:6ml,水化体积:3ml,超声时间:30min。平均包封率为95.6%,透射电镜观察icsii纳米脂质体,呈球形或近似球形,平均粒径86.7nm,多分散指数(polydispersityindex,pdi)为0.272。2、采用das3.2.8软件计算大鼠尾静脉注射icsii纳米脂质体及icsii原型药物的药时曲线及主要药代动力学。结果t1/2z:原型药物组1.81±0.67h,纳米脂质体组3.25±1.478h(p<0.05),较原型药物t1/2z明显延长。mrt(0-t)和mrt(0-∞)分别为原型药物组0.45±0.39h和0.49±0.48h,纳米脂质体组为1.60±0.65h(p<0.01)和2.22±1.03h(p<0.01),较原型药物组明显延长。aumc(0-t)和aumc(0-∞)原型药物组为575.14±135.47h×h×ug/l和608.96±181.33h×h×μg/l,纳米脂质体组1328.73±692.10h×h×μg/l(p<0.05)和2059.45±1478.74h×h×μg/l(p<0.05),较原型药物组明显增大。3、通过对主要脏器中icsii浓度测定,采用das3.2.8计算分别计算纳米脂质体及原型药物组的参数。心t1/2z:原型药物组为0.80±0.30h,纳米脂质体组为1.21±0.29h(p<0.05),较原型药物组明显延长。脾mrt(0-∞):原型药物组为0.34±0.31h,纳米脂质体组为:1.35±1.09h(p<0.05),较原型药物组明显延长。肺mrt(0-∞):原型药物组为0.87±0.44h,纳米脂质体组为1.42±0.51h(p<0.05),较原型药物组明显延长。脾的一阶矩曲线下面积aumc(0-t)和aumc(0-∞)分别为:原型药物组为128.36±68.17 h×h×μg/L,纳米脂质体组357.22±258.46 h×h×μg/L(p<0.05),较原型药物组明显增大。结论:本课题制备了包封率大于90%,粒径小于100 nm,分散性良好的ICSII纳米脂质体。建立了快速、灵敏、可靠的测定ICSII在大鼠血浆和组织中浓度的方法。通过制备纳米脂质体,延长了ICSII在血中的消除相半衰期和平均滞留时间。延长了ICSII在大鼠心的半衰期,增加了脾、肺中平均滞留时间。血和脾中一阶矩曲线下面积较原型药物组大。