MDR1基因表达与调控的研究

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目的:①探讨汉族人群中多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1) C3435T位点多态性对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中mRNA表达的影响。②通过研究苯巴比妥(phenobarbitone,PB)对PBMCs MDR1表达的影响,了解PBMCs MDR1的表达是否也能被诱导,并研究了PBMCs中MDR1与孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达的关系,初步探讨其意义。方法:①以163名(男性98名,女性65名)无亲缘关系的中国健康汉族儿童的外周血标本为研究对象,采用PCR-RFLP技术检测其MDR1基因C3435T位点的基因型,实时荧光定量PCR法检测其PBMCs MDR1 mRNA表达水平。②将36名健康儿童的PBMCs分离后,将其分编为无培养组(不进行培养和药物处理)、自然培养组(只单纯培养不进行药物处理)及PB培养组(加入终浓度为40μm/L苯巴比妥处理)。将自然培养组与PB培养组培养24h后,实时荧光定量PCR检测这三组细胞的MDR1及PXR mRNA表达水平。③Hardy-Weinberg检验采用卡方检验。不同分组间的PBMCs MDR1或PXR表达水平的比较采用t检验或单因素方差分析,MDR1及PXR的表达水平相关性分析使用Spearman法。P<0.05表示差异有统计学意义。结果:①在163名健康中国汉族儿童中,63名为野生型纯合子3435CC型,78名为杂合子CT型,22名为突变型纯合子TT型,CC、CT与TT各基因型的发生频率分别为38.7%、47.9%与13.5%;其C等位基因频率为62.6%,T等位基因频率为37.4%;C3435T多态性位点的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);CC、CT和TT各基因型组间PBMCs MDR1 mRNA表达水平分别为(4.562±3.383)×10-3、(4.673±3.710)×10-3和(4.489±2.928)×10-3,差异无统计学意义(P>0.05)。②未培养组、自发培养组和PB培养组MDR1 mRNA表达水平分别为(4.475±2.980)×10-3、(4.991±4.165)×10-3及(7.265±5.067)×10-3 , PXR mRNA在以上三组中的表达水平分别为(2.073±1.335)×10-3、(1.836±1.467)×10-3及(3.014±2.238)×10-3。PB培养组MDR1和PXR表达水平均高于未培养组和自发培养组,差异有统计学意义(P<0.05),而未培养组和自发培养组之间的MDR1和PXR表达水平差异无统计学意义(P>0.05);相关性分析提示,苯巴比妥处理后MDR1及PXR mRNA的表达水平呈正相关关系(r=0.517,P=0.0012)。结论:①汉族人群中MDR1基因C3435T多态性对PBMCs mRNA表达并没有显著性影响,对于汉族儿童C3435T位点多态性不能作为推测MDR1表达水平的依据。②苯巴比妥可诱导PBMCs MDR1表达,提示PBMCs MDR1表达也能被诱导。苯巴比妥诱导后PXR与MDR1的表达水平呈正相关关系,提示PXR可能参与了PBMCs MDR1基因的表达调控。
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