猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

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猪瘟(classicalswinefever,CSF)是由猪瘟病毒(classicalswinefever virus,CSFV)引起猪的一种以稽留高热、广泛出血和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。CSFV是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的成员,该属还有牛病毒性腹泻病毒1型(Bovineviraldiarrheavirustype1,BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)、绵羊边界病病毒(Borderdisease virus,BDV)、长颈鹿瘟病毒(Pestivirus of Giraffe)(暂定种)和非典型瘟病毒(D32/00_‘HoBi’)。CSFV为单股正链RNA病毒,基因组长约12.3kb,两侧为高度保守的5′和3′非编码区(UTR),中间含一个大的开放阅读框(ORF),编码4种结构蛋白(C、E1、E2和Erns)和7种非结构蛋白(Npro、p7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。  本研究用 PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出一株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)株。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,提取JL-1(06)株RNA,用RT-PCR扩增得到了覆盖JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中,经测序和拼接后,获得了JL-1(06)株基因组全序列。经测定,JL-1(06)基因组全长12298bp,含有1个大的ORF,编码一个由3898个氨基酸残基组成的多聚蛋白,其5?-UTR和3?-UTR分别由373bp和231bp组成。  将JL-1(06)株与国内外已发表的CSFV毒株全基因组序列进行比较,结果表明,JL-1(06)株与石门系毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性均在99.4%以上,与Eystrup、ALD、Alfort/187、Alfort A19、CAP、Glentorf、GPE?、cF114和SWH株的核苷酸和氨基酸同源性在97%以上;与6株BVDV核苷酸序列同源性在66.5~71.6%。表明JL-1(06)株属于CSFV的1基因型中的1.1基因亚型。  对JL-1(06)、Shimen/WHU和Shimen/HVRI这3个毒株间单个基因的核苷酸及推定的氨基酸序列进行比较,结果表明,Npro、Erns、E2、NS2和 NS5B等基因变异较大,而C、E1、P7、NS4A和NS4B等基因相对保守。
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