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伊氏锥虫病是一种有广泛寄主的动物原虫病，所有哺乳动物都易感。在我国南方主要感染牛(特别水牛)，大多数牛感染伊氏锥虫后能直接引起个体的急性死亡或隐性感染，造成贫血，进行性消瘦、死胎、流产，泌乳减少等。是我国畜牧业特别是养牛业的一大障碍。由于虫体频繁的抗原变异，至今没有成功的疫苗问世。所以该病的控制还是以药物为主。但由于该病在牛体内大多呈慢性经过，虫血症起伏，难于及早发现。所以采用合适的监测方法及早进行诊断和对畜群进行血清学预测，才能及早用药，及时控制该病的扩散。本试验首先用伊氏锥虫湖北水牛单克隆虫株10~7条耳静脉感染1只新西兰大白兔，每三天采血分离一个锥虫群体并进行单虫克隆，最后一个未克隆群体再感染另一只兔子，同上方法收集变异体，依次感染四只兔子，共收集到40个锥虫克隆群体。同时制备相应的40个抗锥虫单价血清。将40个克隆群体与40个抗血清进行IFA交叉血清学检测，鉴定为19个不同的抗原变异型。经IFA试验检测筛选到两个变异体HbTat1.18和HbTat1.15能与多数异源克隆锥虫血清反应产生较强的蓝绿色荧光。利用混合蛋白酶抑制剂结合超高速逐级离心的方法成功分离、纯化了一株变异体HbTat1.18的表面糖蛋白(VSG)。经SDS-PAGE电泳分析所提VSG较纯，分子大小约为63.5KD。利用经IFA鉴定的变异型HbTat1.18潜在的特殊抗原性，提取HbTat1.18的可溶性抗原作为包被抗原，建立了检测伊氏锥虫抗体的间接ELISA方法，并对ELISA的反应条件进行了探索，确定抗原的最适包被浓度为2.59μg／ml，检测血清稀释为400倍稀释，血清与抗原的最佳反应时间为1.5h，酶标二抗最佳作用时间为1h，底物的最佳显色时间为20min。采用已确立的ELISA反应条件，检测了26份已检测判定为阴性的水牛血清。依据阴阳临界值=阴性血清OD平均值+3SD，确定阴阳临界值为0.227。用此方法检测包被的抗原不与在牛感染率高的片形吸虫的阳性血清发生交叉反应，对实验感染的水牛抽测的16份血清多次测定100％呈阳性，对8份阴性血清多次测定100％呈阴性，初步认为该ELISA方法具有良好的特异性。应用建立的ELISA方法观察了实验感染伊氏锥虫水牛的抗体消长情况以及对广西部分地区的水牛进行了血清流行病学的初步调查。对采自广西部分地区的79份水牛血清的检测，结果有23份呈阳性，阳性率达29.1％。本试验筛选到有特殊抗原性的变异体HbTat1.18和HbTat1.15，其中用变异型HbTat1.18的可溶性蛋白作包被抗原成功建立了检测伊氏锥虫抗体的间接ELISA方法。应用该法对广西部分地区水牛伊氏锥虫血清进行流行病学的初步调查，证明伊氏锥虫病在广西仍然流行，而且水牛伊氏锥虫感染率较高，应引起有关部门的注意，做好我区水牛伊氏锥虫病的检测和防控工作，以确保我区水牛生产的健康快速发展。