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目的在前期工作的基础上，将高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound, HIFU)治疗后坏死肿瘤组织中分离和纯化的热休克蛋白(heat shock protein, HSP) 70-抗原肽作为肿瘤疫苗，体外活化树突状细胞（dendritic cells, DC），并刺激T淋巴细胞增殖为细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL），观察CTL在体外特异性杀伤肿瘤靶细胞的能力，为阐明HIFU治疗后机体抗肿瘤免疫功能增强的机制提供实验室依据。方法1、制备小鼠骨髓树突状细胞正常小鼠骨髓中提取骨髓细胞，在rmIL-4、rmGM-CSF条件下培养，观察形态学变化，用流式细胞计数仪(Fluorescein activated cell sorter, FACS)检测细胞表面标记物CD11c、DEC205的表达。2、用肿瘤抗原活化树突状细胞根据抗原的不同，实验分为以下五组：HIFU治疗后B16肿瘤HSP70-<WP=8>肽复合物组，HIFU治疗后H22肿瘤粗提物组，H22肿瘤HSP70-肽复合物组，血清抗原组和H22肿瘤粗提物组。上述抗原分别与DC共同培养24hr，FACS检测CD80、CD86和MHCII的表达，ELISA法检测DC分泌的细胞因子IL-12及其T细胞分泌的INF-γ。3、活化树突状细胞诱导的抗肿瘤效应MTT法检测H22肿瘤粗提物组、B16肿瘤HSP70-肽复合物组、HIFU后H22肿瘤粗提物组和H22肿瘤HSP70-肽复合物组的DC体外激活T淋巴细胞增殖的能力，以及CTL对H22肝癌细胞的特异性杀伤效应。4、SPSS10.0统计软件进行两两之间的单因素方差分析。 结果1、小鼠骨髓树突状细胞的制备骨髓细胞在IL-4、GM-CSF作用下，培养7天即可诱导出有典型形态学特征的DC。流式细胞仪分析发现DC特异性表达CD11c、DEC205。2、肿瘤抗原对树突状细胞的活化 H22肿瘤粗提物组、B16肿瘤HSP70-肽复合物组、HIFU后H22肿瘤粗提物组和H22肿瘤HSP70-肽复合物组CD80、CD86和MHCII分子的表达、IL-12和INF-γ水平均高于鼠血清组，P＜0.001；其中，H22肿瘤HSP70-肽复合物组上述指标明显高于H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组，P＜0.05，但与B16肿瘤HSP70-肽复合物组之间无显著差异。3、活化树突状细胞诱导的抗肿瘤效应B16肿瘤HSP70-肽复合物组和H22肿瘤HSP70-肽复合物组的脾淋巴细胞的增殖率均高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤<WP=9>粗提物组 (P＜0.001)；但两组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。H22肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对H22肿瘤细胞的杀伤率为70.0%，明显高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组（P＜0.001），但对非靶细胞B16肿瘤的杀伤率与上述各组的差异无统计学意义；B16肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对B16肿瘤细胞的杀伤率为78.5%，对H22细胞的杀伤率为21.4%，表明CTL对肿瘤细胞的杀伤作用是特异性。结论1、小鼠骨髓细胞加入IL-4、GM-CSF诱导出的DC具有典型的细胞形态学特征和细胞表面标志物的表达。 2、HIFU后肿瘤抗原能诱导DC分化为成熟的DC，表达CD80、CD86和MHCII，分泌IL-12和刺激T细胞分泌的INF-γ。其中，HSP70-肽复合物诱导DC分化和刺激T细胞分泌INF-γ的作用最明显。3、HIFU治疗后坏死肿瘤组织中的HSP70-肽复合物作为肿瘤疫苗，通过活化DC和刺激T淋巴细胞增殖为CTL，发挥特异性抗肿瘤免疫功能。