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匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera)属多年生草本植物,广泛分布于寒带、温带及亚热带地区,是重要的城市绿化植被及造景材料。在全球气候变暖的环境下,高温胁迫成为限制匍匐翦股颖生长的重要逆境因素。MicroRNA(miRNA)是一类内源非编码、单链小分子RNA,它通过转录后翻译抑制或剪切降解等途径负调控其对应靶基因的表达,参与了多种生理活动过程,其中包括对干旱、冷害、盐胁迫等逆境的响应。本研究以耐热型匍匐翦股颖草坪草品种PennA4为材料,采用新一代高通量测序技术,分析了PennA4高温胁迫处理组(HS)和对照组(C)两个小RNA文库,共鉴定获得192个保守的成熟niRNA序列,其中84个为高温响应miRNA成熟序列,相对表达差异最高达近7倍。进一步二级结构预测分析,鉴定得到10个新miRNA成熟序列,其中4个为高温响应miRNA。荧光实时定量PCR分析了15个高温响应miRNA在高温胁迫过程中的表达,呈现持续升高、持续下降、先升后降或先降后升4种模式。对高温响应miRNA进行靶基因预测,GO基因功能注释显示,相关基因功能主要涉及生物过程、细胞组分和分子功能3个大分支和41个小分支。部分分支与水稻高温响应结果明显不同,如与Single-organism process、regulations of biological process、organelle相关的靶基因没有出现在水稻中,与biosynthetic process、 nuclecobase-containing compound、cellular-component、nucelus、molecular funtion相关基因的没有出现在匍匐翦股颖中。KEGG代谢通路分析显示,匍匐翦股颖草坪草高温响应miRNAs的靶基因主要涉及植物激素信号转导、植物病原交互作用及聚醚脂代谢等抗逆相关的通路。本研究初步探索了匍匐翦股颖高温响应miRNA分子机制,为将来研究草坪草高温抗逆提供了理论框架和数据基础。