【摘 要】
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目的:观察D159687对过氧化氢所致的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将HT22细胞分为6组,H_2O_2作为损伤因素模拟氧化应激损伤。对照组常规培养。其余五组经不同浓度的D159687预处理细胞2h,后经H_2O_2作用细胞24h。应用CCK-8法测定细胞存活率;采用试剂盒分别测定细胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力;TUNEL法检测细胞凋亡
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目的:观察D159687对过氧化氢所致的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将HT22细胞分为6组,H2O2作为损伤因素模拟氧化应激损伤。对照组常规培养。其余五组经不同浓度的D159687预处理细胞2h,后经H2O2作用细胞24h。应用CCK-8法测定细胞存活率;采用试剂盒分别测定细胞丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;ROS检测试剂盒检测胞内ROS水平;运用Western blot方法检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase3和NADPH氧化酶亚基gp91phox、p47phox蛋白含量。结果:（1）H2O2（0.2,0.4,0.6 m M）处理HT22细胞24小时对HT22细胞无明显损伤作用,H2O2（0.8,1,1.2,1.4 m M）处理HT22细胞24小时可显著抑制HT22细胞的细胞活力,且抑制程度与浓度有正相关性,1 m M H2O2使细胞存活率下降为正常组的（52.65±3.21）%,细胞损伤程度适中,以此浓度建立模型进行实验;（2）D159687（0.5,1,2,4μM）预处理2小时可呈浓度依赖性的逆转H2O2所致的HT22细胞损伤;（3）不同浓度D159687预处理下,HT22细胞凋亡水平较模型组均有下降,与D159687浓度具有一定的相关性;（4）不同浓度D159687预处理能逆转H2O2所致的ROS、MDA水平升高及SOD活力升高;（5）D159687处理后,检测HT22细胞中p47phox、gp91phox的蛋白表达量,发现其表达量较模型组明显降低,与浓度有相关性。结论:D159687可能是通过逆转NADPH氧化酶亚基蛋白的过量表达从而降低神经元细胞内ROS产生,进而降低细胞氧化应激水平,逆转过氧化氢诱导的神经细胞损伤及凋亡。
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