论文部分内容阅读
本文对体外诱导孤雌胚胎干细胞向生殖细胞分化问题进行了研究。随着社会压力的增加、环境的恶化，人类的生殖健康情况越来越引起人们的关注。现实问题迫使许多女性选择晚育，而女性的生殖能力随着年龄的增长呈下降趋势，因此人们对由卵巢衰老引起的疾病如不孕不育、胎儿的健康问题愈加重视。而卵子再生这一主题便成为了解决女性衰老的方法之一。同样，配子发生及其调控机制的研究越加显示出重要的医学价值和深远的社会意义。在小鼠中，未分化的生殖细胞前体被称为原始生殖细胞primordial germ cells(PGCs)。而精子和卵子都是由PGCs经过减数分裂形成。胚胎干细胞最显著的特征就是具有多能性。它能够进行无限增殖并且能在体内和体外分化成三胚层的各种细胞类型，当移植到发育的囊胚中后可以发育成新生的个体。胚胎干细胞由于其具有的独特性质和在生殖医学等领域的巨大应用潜力而受到科学界的广泛关注。将未受精的卵子激活后，从中分离的胚胎干细胞即为孤雌胚胎干细胞parthenogenetic embryo stem cells(pESC)。该细胞具有正常胚胎干细胞的所有特性，用该细胞诱导目的组织在理论上可以避免一些免疫排斥问题。由于该细胞来源于卵子，所以我们选择它在体外进行卵子的诱导。RA是vitamin A的一种代谢产物。在胎儿的发育中RA对细胞的生长、分化以及衰老都起到作用。RA对体外诱导PGC的形成也有作用。Blimp1是PGC形成时最先表达的基因，我们先构建了blimp1-GFP的1116pES细胞系，通过用RA在体外诱导1116pES cell向PGC分化，对诱导过程中所形成的embryonicbody(EB)进行检测时，并没有看到blimp1表达的荧光，但PGC形成的晚期基因mvh和dazl的表达量上升很多倍。但减数分裂早期的基因如sycp3的表达量并没有上升。说明此时的EB可能处于PGC晚期阶段，接下来将该EB通过卵巢注射或者肾包囊移植到体内进一步检测。结果发现在注射由RA诱导下形成的EB的卵巢切片中有许多类似卵泡状的东西，但这些是否是真正的卵泡、是否由所注射的EB发育而来、是否具有可育性都需要我们进一步去研究。这些结果为我们进一步诱导可育卵子的形成以及探究RA与dazl基因间的调控关系提供了重要依据。