【摘 要】
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本文利用在线生物软件初步分析确定比canstatin N端更小的功能区，命名为N67(11-77aa)。采用PCR技术，以含有人血管能抑素cDNA的克隆载体pSP72C为模板，扩增出N67片段。经DNA序
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本文利用在线生物软件初步分析确定比canstatin N端更小的功能区，命名为N67(11-77aa)。采用PCR技术，以含有人血管能抑素cDNA的克隆载体pSP72C为模板，扩增出N67片段。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K，获得的重组质粒pPIC9K-N67。转化毕节酵母GS115，构建能表达N67的酵母工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-N67)。对该酵母工程菌进行发酵，在甘油中培养24 h后，用甲醇诱导48 h，取样进行SDS-PAGE分析，结果显示：N67蛋白在酵母工程菌GS115(pPIC9K-N67)中获得表达，表达产物分泌至胞外分泌量为30 mg/L。表达产物经Streamline SP离子交换层析纯化，纯度达90％，回收率为65％。
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