人β2-糖蛋白I的克隆、表达及其功能的研究

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为了研究β2-GPI在体内的生理作用.该文从血浆中分离纯化了人β2-GPI(hβ2-GPI),同时使用pQE表达载体表达了hβ2-GPI,荧光蛋白连接的人β2-GPI(rGFP-hβ2-GPI),并利用镍金属螯合层析法进行纯化,应用Western blot和ELISA对蛋白进行鉴定.使用这些蛋白质对β2-GPI与凋亡细胞结合的特怀进行了研究.我们得到的结果表明,人β2-GPI和荧光蛋白连接的人β2-GPI均能够与凋亡细胞结合,说明这种结合不依赖糖链参与.我们首次发现β2-GPI既可与早期凋亡细胞结合,又可与晚期凋亡细胞结合.使用β2-GPI与Annexin V的竞争抑制实验,我们第一次证明β2-GPI通过磷脂酰丝氨酸(PS)与凋亡细胞结合.我们得到的rGFP-hβ2-GPI对凋亡细胞的检测结果优于通用的凋亡细胞检测试剂Annexin V的检测结果.我们推测,APS和SLE病人的aβ2-GPI可能是在识别凋亡细胞内自身抗原的免疫反应过程中通过表位扩散作用产生的.
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