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伊枯草菌素A(iturin A)是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的一种具有代表性的两性环脂肽类化合物，其分离提取有较大难度。本论文主要研究了酸沉淀法、溶媒萃取法、大孔树脂吸附法以及纳滤等iturin A的分离提取方法，以开发技术上可行、成本低的提取工艺技术，促进iturin A向工业化生产的转化;同时研究了测定发酵液中iturin A含量的固相萃取-高效液相色谱法，为iturin A的质量控制提供了方法学的参考。本论文研究主要分为两章内容: 第一章:伊枯草菌素A分离提取方法的研究 (1)酸沉淀法提取iturinA通过采用酸沉淀法从发酵液中提取iturinA的研究，确定了酸沉淀最合适的条件，当调节发酵液的pH2.0酸沉过夜，离心收集沉淀，然后用pH8.0的Tris-HCl缓冲液来溶解沉淀，iturin A的生物活性收率可以达到90％。 (2)溶媒萃取法提取iturinA采用溶媒萃取法从发酵液中提取iturin A，结果表明，氯仿、石油醚、乙酸乙酯均不能直接从发酵液中萃取出iturin A，而采用乙醇/硫酸铵双水相萃取技术可以将iturinA从发酵液中萃取出来，进而研究了乙醇/硫酸铵双水相萃取iturinA的影响因素，结果表明，iturinA在该体系中的活性收率随着乙醇和硫酸铵的质量分数的增加而增大，且在室温下，当发酵液的pH=6.3左右，乙醇的质量分数为19.74％，硫酸铵的质量分数为22.69％时，iturinA的活性收率可达到97％，这是一种新的分离提取iturinA的方法。 (3)大孔吸附树脂提取iturin A采用树脂动态吸附-解吸方法，通过研究一系列的影响树脂吸附分离行为的因素，确定了利用DA201型树脂从发酵液中分离提取iturinA的工艺条件。结果表明，DA201型树脂对发酵液中iturinA的动态饱和吸附量可达到3.48mg/g，以1BV/h的速度上样，动态吸附率可以达到95.56％，用6BV的蒸馏水、5BV的30％乙醇以2BV/h速度洗脱除杂，2BV的95％乙醇以1BV/h的速度洗脱，收集95％乙醇洗脱液，其洗脱率可以达到92.41％，最后减压浓缩干燥得到iturinA膏状产品，DA201树脂是一种从发酵液中分离提取iturin A的较理想的吸附剂。 (4)纳滤浓缩iturinA纳滤（nanofiltration，NF）是介于反渗透与超滤之间的一种压力驱动型膜分离技术。采用纳滤浓缩发酵液，在操作压力0.1～0.2 MPa，温度20℃左右的条件下，纳滤膜对iturin A的截留率达到100％，收率达到97.55％，浓缩倍数达5.7倍，取得了较好的浓缩效果。用NaOH溶液进行碱清洗，膜通量可恢复到实验前的93％，达到了清洗的标准。 第二章固相萃取-高效液相色谱法测定iturinA含量的研究 根据DA201等一些大孔吸附树脂能吸附iturin A的特性，通过装有树脂作填料的萃取小柱，对含有iturin A的发酵液进行固相萃取，将此作为一种iturin A含量测定的样品预处理方法，有效的降低了HPLC测定过程中其它杂质成分的干扰。并在此基础上，对测定iturin A的液相条件进行了优化，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定发酵液中iturin A含量的检测方法。液相条件为:色谱柱:Agilent HC-C18(4.6*150mm)，流动相:乙腈∶10mM乙酸铵=3∶4，紫外检测波长:214nm，柱温38℃，进样量10μL，流速0.8ml/min。结果表明，在18m in内可以很好的检测到iturinA，在0.125～2mg/mL的浓度范围内iturin A的含量和峰面积之间有良好的线性关系(R2=0.996)，精密度RSD为0.61％，iturinA的平均回收率为91％,该方法是一种快速、准确、重复性好的定量检测方法。