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目的：
1.分析2型糖尿病(type2diabetesmellitus，T2DM)患者线粒体DNA(mitochondrialDNA，mtDNA.)ND4基因序列，筛查线粒体ND4基因变异的位点。
2.分析mtDNAND4基因变异与T2DM及其慢性并发症之间的关系，探讨mtDNAND4基因检测对于T2DM的诊断价值。
方法：
1.根据1999年WHO糖尿病诊断标准，收集浙江籍人群中确诊为T2DM的无血缘关系患者230名，对所有患者作常规生化指标检测并记录基本临床资料。159名年龄匹配的健康体检者作为对照，排除高血压、高脂血症、脑血管病、糖尿病及家族史、口服葡萄糖耐量异常者。
2.提取所有受试者全血基因组DNA，采用PCR扩增mtDNAND4基因，直接测序后与剑桥参考序列(revisedCambridgeReferenceSequence，rCRS)进行比对，寻找线粒体ND4基因变异的位点。
3.利用生物信息学软件ClustalX及蛋白相关数据库，从氨基酸变异情况、蛋白结构分析mtDNAND4基因变异，并结合统计学方法分析该基因变异与T2DM及其慢性并发症的关系。
结果：
1.在T2DM患者中发现59个mtND4变异位点，未见缺失和插入。对照组中发现52个变异位点。所有位点在两组间未见显著性差异，其中G11719A在两组的检出率均为100％。
2.T2DM组和对照组多重SNP比较差异无显著性。但在T2DM组中，同时携带T10873C、G11719A、G11944A、A12026G多重SNP的发生率比同时携带G11719A、G11944A、A12026G的发生率高(P＜0.05)，对照组中两者无显著性差异。
3.在T2DM组检测到的59个变异位点中，有15个突变导致所编码的氨基酸发生改变，7个发生了氨基酸性质的改变。15个错义突变中，T11087C、A11172G、G11762A突变导致多种哺乳动物中的高度保守性发生改变。
4.将T2DM患者分为肥胖组和非肥胖组，T10873C在非肥胖组中发生率较肥胖组高(P＜0.05)。部分仅出现于T2DM组中的变异位点多分布于非肥胖组，包括C11061T、T11087C、T11318C、G11762A、T11978C、C12092A。
5.将T2DM患者分为有家族史组和无家族史组，T11410C在有家族史组中的发生率高(P＜0.05)，有家族史组患者的HbA1C和LDL-C均高于无家族史组(P＜0.05)。
6.根据T2DM慢性并发症(视网膜病变、周围神经病变、肾病和高血压)发生情况，对有变异的163例患者分别进行分组和临床表现分析，发现年龄、病程、BMI、2h-PG和HbAlc在不同的分组间差异有显著性。其他各项指标在分组中差异无显著性。
7.分组分析结果显示，T11410C变异率在并发视网膜病变、周围神经病变的患者组均高于未并发组(P＜0.05)。高血压患者人群中G11914A的发生率比未合并高血压患者人群高。
结论：
1.线粒体ND4基因存在大量变异，大部分可能为mtDNA的多态性位点，但不能排除部分位点提高个体对T2DM的易感性。
2.仅存在于糖尿病患者中，导致较保守的氨基酸发生性质改变的变异，如G11762A、G11969A，可能与糖尿病的发生存在一定的关系。T11410C可能增加了个体患T2DM的易感性。若患者携带这些变异位点，需采取早期预防措施。
3.携带mtND4多重SNP:T10873C、G11719A、G11944A、A12026G的个体可能对T2DM更易感。
4.T11410C可能与并发视网膜病变、周围神经病变有关，携带该变异的患者应积极控制血糖，尽量减少并发症的发生。携带G11914A的患者应注意控制血压，尽量减少并发症的发生。
5.部分变异位点以低频率出现，如T11318C、G11963A、C11323T、T11339C、C11647T、A12055G、T12136C，但都存在于有并发症组中，推测这些位点可能与能量代谢失衡相关，增加了糖尿病患者并发某种慢性并发症的易感性。