番茄抗花叶病毒（ToMV）的鉴定及其类似序列分离

• 作 者: 李敏
• 机 构: 四川农业大学
• 出 处: 四川农业大学
• 发表日期: 2005年期
• 关键词: 番茄 番茄花叶病毒病 材料鉴定 基因序列筛选

番茄（Lycopersicon esculentum Mill）,属于茄果类番茄属,原产秘鲁厄瓜多尔一带的喜温植物。番茄适应性强,果实风味独特,营养丰富,世界上重要的农作物之一。番茄花叶病毒病（ToMV）是一种世界性的病害,分布广,危害严重,造成品质下降,产量锐减。按常规培育、改良品种周期较长、效率低,目前为止没有行之有效的防治ToMV的措施。在生物技术迅速发展的今天,应用转基因技术不仅加速育种的进程,而且避免了不良基因留给后代。 本研究应用20个番茄为材料,材料来源:四川农业大学保存的种质资源和四川优良的栽培品种。研究的主要内容:田间自然条件下和室内接种ToMV后对各材料病情指数的调查,并对接种前后抗性酶（过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶）的活性进行测定及显著性分析,鉴定20个材料对ToMV抗性程度。同时应用RAPD对20个番茄材料进行亲缘关系的分析,根据植物抗病基因的同源性和保守序列的特性及前人的研究设计特异引物进行PCR扩增。研究结果如下: 1.通过田间、室内发病指数的调查结果与分析及抗性酶活性测定,鉴定20个材料对番茄花叶病毒病的抗性程度,将材料分成三类:第一类为抗病材料:中杂9号、早红宝、W_262-4、黄化黄叶番茄、黄圣果和美国番茄;第二类为耐病材料:美味樱桃番茄、加州大红1号、川杂-10和Oh-2-2-11;第三类为感病材料:L-402、今科红玫、大红番茄合作903、加州大红4号、改良美国903、宝岛巨星、宝大903番茄、W₂₆₂、Oh-2-2-6和金刚2号大番茄。 2.RAPD聚类分析结果:聚类距离从0到0.72,以0.36为标准将20个参照材料分为三大类。第一类为美味樱桃番茄、Oh-2-2-11、黄化黄叶番茄。第二类为中杂9号;最后一类为L-402、今科红玫、加洲大红番茄4号、改良美国903、宝岛巨星、早红宝、宝大903、大红合作903、加洲大红番茄1号、W₂₆₂、中杂—10、Oh-2-2-6、黄圣果、金刚2号大番茄、W_262-4、美国番茄。 3.根据植物抗病基因的同源性和保守序列的特性及前人的研究设计两对特异引物对筛选材料扩增,结果如下:抗病材料扩增出一条比较亮的谱带,耐病材料扩增出一条相对较暗的谱带,扩增条带分子量的大小相似;感病材料没有扩增出谱带,我们初步认为这条带是抗番茄花叶病毒病的类似序列。