论文部分内容阅读
目的:采用数据挖掘技术分析刘嘉湘教授中药结合吉非替尼治疗非小细胞肺癌的治则和核心处方，并进一步研究其基本处方抑制吉非替尼敏感和耐药细胞的作用和机理，为中医药结合吉非替尼治疗肺癌的提供科学的实验依据，为中医药结合靶向治疗提供新思路和方法，丰富和发展扶正治癌的理论。
方法:刘嘉湘教授中药结合吉非替尼治疗非小细胞肺癌核心处方挖掘研究，收集刘嘉湘教授2010年12月1日至2013年1月31日间中药汤剂结合吉非替尼治疗的肺腺癌门诊患者，建立《吉非替尼治疗后NSCLC患者临床个体化诊疗数据库》;采用聚类分析、主成分分析和关联规则分析数据挖掘技术，研究刘嘉湘教授中药结合吉非替尼治疗非小细胞肺癌治则和核心处方。
养阴解毒方及其结合吉非替尼抑制吉非替尼敏感和耐药人肺腺癌细胞的作用和机理的实验研究，选择吉非替尼敏感人肺腺癌细胞株PC9及其获得性耐药细胞株PC9/R，采用血清药理学的方法，研究以临床研究中提炼出的养阴解毒方及其结合吉非替尼的体外细胞毒作用，流式细胞术法检测其对PC9和PC9/R的细胞凋亡及周期的影响;Western-blot法检测养阴解毒方及其结合吉非替尼对PC9和PC9/R细胞株的EGFR重要下游信号通路PI3K/Akt中的关键激酶Akt磷酸化和PTEN表达的作用。
结果:1）刘嘉湘教授中药结合吉非替尼治疗非小细胞肺癌多为清热解毒类及养阴类用药，前者使用频次为2453次，包含药物共28味;后者使用频次共计1716次，包含药物味数共19种。其中使用频次在60次（频率＞21.27％）共有21种，其中使用次数较多者为石上柏、北沙参、蛇舌草、麦冬;2）核心处方由清热解毒9药及养阴8药共同组成，频次分别为2243次(26.9％)以及1453(17.4％)，药物分别为蛇舌草，生牡蛎，夏枯草，石见穿，干蟾皮，鱼腥草，蛇六谷，浙贝母，山慈菇，北沙参，绞股蓝，麦冬，石斛，白英，知母，黄柏，丹皮。以方测证并结合课题前期临床实验结果，总结刘嘉湘教授中药结合吉非替尼治疗非小细胞肺癌治则可总结为养阴解毒;3）通过关联规则Apriori算法，得出在所有处方中中药两药关联规则为北沙参对麦冬同时出现频度最高，为324次;三药关联主要为清热解毒药、养阴生津药、止咳化痰药、滋阴养血药、理气健脾药之间的配伍;症状与药物之间的关联表现多以阴虚毒热为症状配对养阴解毒药物。4）①养阴解毒方对人肺腺癌PC9及耐药株PC9/R均有增值抑制作用，并有量效关系;②吉非替尼联合养阴解毒方低剂量抑制PC9效果最优，吉非替尼最低浓度药物敏感度从低于30％(≤25.26％)提高到大于60％(≥60.29％)，结果具有统计学意义(P＜0.001)，协同作用明显（Q值均＞1.15）;③吉非替尼联合养阴解毒方低剂量组抑制PC9/R效果最优(P＜0.001)，吉非替尼最低浓度药物敏感度从低于10％（≤5.506％为不敏感）提高到接近60％(≥57.29％)，结果具有统计学意义(P＜0.001)，增效作用明显（Q值均＞0.85）;5）①养阴解毒方可增强吉非替尼诱导人肺腺癌PC9细胞凋亡的作用，抑制了正常细胞增殖并增加了早期凋亡细胞，均有统计学意义(P＜0.01)，且两者之间有交互作用(P=0.008，P=0.004)，②养阴解毒联和吉非替尼组较吉非替尼单药组可明显提高吉非替尼诱导PC9/R细胞凋亡的能力，有显著统计学意义(P＜0.001);③吉非替尼单药组较养阴解毒方组明显在G0-G1期细胞比例增高(P=0.0048);而G2-M期养阴解毒方组与联合用药组与吉非替尼单药组均有明显细胞比例增高(P＜0.001);④养阴解毒方含药血清组及联合用药组干预后人肺腺癌PC9/R细胞S期均较吉非替尼单药细胞周期缩短(P＜0.01，P＜0.001);6)①PC9/R细胞同样在吉非替尼干预下AKT活化表达均明显超过PC9细胞，有统计学意义(p=0.030，p=0.036);养阴解毒方组与联合用药组均比单药吉非替尼能够明显抑制PC9/R的p-AKT活化位点Thr308的磷酸化，有统计学意义(p=0.016，p=0.012)，同样也能显著抑制p-AKT活化位点Ser473的磷酸化，有统计学意义(p=0.0063，p=0.006)。②PC9/R的PTEN表达显著低于PC9，有统计学意义(p=0.0024);联合用药组PC9/R的PTEN表达显著高于其余各组，有统计学意义(p=0.016，p=0.00032;p=0.0027)。
结论:刘嘉湘教授中药结合吉非替尼治疗非小细胞肺癌多为清热解毒类及养阴类用药，核心处方由清热解毒10药及养阴8药共同组成，药物分别为蛇舌草，生牡蛎，夏枯草等，治则可总结为养阴解毒。养阴解毒方可增加人肺腺癌耐药株细胞PC9/R对于吉非替尼的药物敏感性，两药联用可明显增强抑制PC9及PC9/R细胞株生长抑制的作用。养阴解毒方可通过诱导各株细胞凋亡来实现对其细胞周期的调控，从而抑制肿瘤细胞的恶性生长，实现对吉非替尼耐药肺腺癌细胞的控制。养阴解毒方可抑制人肺腺癌吉非替尼耐药细胞株PC9/R的AKT在Thr308与Ser473位点的活化，可调节耐药细胞株PC9/R的PTEN的表达恢复到非耐药细胞表达水平;两药联用可显著上调PTEN的表达，结合上述各实验可认为，养阴解毒方以提高细胞内环境中重要抑癌基因PTEN的表达，抑制信号通路关键蛋白AKT的磷酸化，从而起到抑制肿瘤生长、逆转耐药的双重作用。