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肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率增长最快,预后最差的恶性肿瘤之一。肺癌的转移是导致治疗失败和患者死亡的主要原因,而恶性肿瘤细胞获得"失巢凋亡"耐受能力是肿瘤发生转移的先决条件。近来研究者发现14-3-3ζ不仅可以通过不同机制在多个层次对凋亡产生抑制效应,而且还对肿瘤的转移有一定的促进作用,特别是增强肿瘤细胞的抗失巢凋亡能力。有实验表明下调14-3-3ζ表达,细胞中T-cadherin(钙粘蛋白),E-cadherin(钙粘蛋白), G-catenin(连环蛋白)等细胞粘附因子表达增多,这是直接与癌细胞侵袭与转移有关的。本研究通过构建靶向14-3-3ζ的siRNA的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的腺相关病毒,为进一步对14-3-3ζ进行相关研究提供实验基础。首先设计靶向14-3-3ζ的siRNA,插入到psiRNA质粒H1启动子下游,Western-Blot检测siRNA的抑制效果。然后从psiRNA质粒上扩增H1-siζ基因表达单位,亚克隆到AAV表达质粒AAV-MCS-EGFP的Mlu1酶切位点,构建重组质粒pAAV-siζ-EGFP。将重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-siζ-EGFP。重组病毒感染HT1080细胞,通过流式细胞术检测报告基因EGFP测定病毒滴度。再次使用Western-Blot检测基于腺相关病毒载体siRNA的抑制效果。最终结果是成功构建重组psiRNA质粒和重组病毒载体pAAV-siζ-EGFP,并且病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒包装成功。本研究成功包装出具有侵染性且正常表达外源目的基因的重组腺相关病毒rAAV-siζ-EGFP,并且构建在腺相关病毒载体中靶向14-3-3ζ的siRNA与在psiRNA重组质粒中同样具有抑制效果,为今后利用腺相关病毒载体进行14-3-3ζ相关的研究提供了实验基础。