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一、二氮嗪预处理对SAP大鼠心肌保护作用及其机制
目的：
SAP胰外器官损伤中，心功能障碍较为常见，研究表明线粒体是心肌细胞内完成心肌保护的重要细胞器，MitoKATP通道在抗凋亡等心肌保护中起着重要作用。本实验采用MitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪预处理模拟心肌缺血预处理防止心肌的缺血损伤，在大鼠SAP心肌损伤模型上检测大鼠血清CK-MB、LDH、心肌细胞Na+-K+-ATPase活性、心肌细胞线粒体膜电位和心肌细胞凋亡指数等，研究MitoKATP通道开放对SAP心肌的保护作用及其可能机制。
方法：
健康清洁级雄性SD大鼠36只，随机分为四组，分别为：空白对照组（K组，6只）、SAP模型组（M组，10只）、DZ+SAP组（D组，10只）、DZ+5-HD+SAP组（H组，10只）。M组采用5％牛磺胆酸钠胆胰管内逆行注入的方法诱导SAP大鼠模型；D组给大鼠连续腹腔注射DZ（20 mg.kg-1.d-1）三天，第三天注射完DZ30min后进行5％牛磺胆酸钠胆胰管逆行注入，具体方法同M组；H组，即分别连续腹腔注射DZ（20 mg.kg-1.d-1）+5-HD（20mg.kg-1.d-1）三天，然后再进行5％牛磺胆酸钠胆胰管逆行注入；K组开腹后，翻动胰腺数次后关腹，不注射牛磺胆酸钠。观察四组大鼠24小时死亡率；四组大鼠于术后24小时腹主动脉取血，检测血清CK-MB、LDH水平；取心肌组织，应用分光光度法测定Na+-K+-ATPase活性；分离心肌细胞线粒体，应用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化；采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况；留取部分心脏、胰腺组织行病理学检查。
结果：
1）血清CK-MB、LDH的变化
与对照组相比，SAP组血清CK-MB、LDH含量显著增加，差异均有统计学意义（P<0.01），说明SAP可致心肌细胞损伤；DZ+SAP组CK-MB、LDH含量虽然高于对照组，但较SAP组明显降低（P<0.01），说明二氮嗪有抗心肌缺血作用；DZ+5-HD+SAP组血清CK-MB、LDH含量明显增加，与DZ组比较有显著差异（P<0.01），与SAP组比较差异无统计学意义，说明5-HD能阻断DZ的心肌保护作用。
2）心肌Na+-K+-ATPase活性的变化
分光光度法检测结果显示，SAP组心肌细胞的Na+-K+-ATPase活性较对照组显著降低（P<0.01），但DZ预处理组Na+-K+-ATPase活性较高，与SAP组相差明显（P<0.05）；而DZ+5-HD+SAP组心肌Na+-K+-ATPase活性较DZ预处理组明显降低（P<0.05），与SAP组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
3）线粒体膜电位的检测
利用阳离子绿色荧光染料罗丹明123检测线粒体膜电位变化，发现SAP组线粒体膜电位较对照组显著降低（P<0.01）；DZ预处理组心肌线粒体膜电位明显高于SAP组（P<0.05）；DZ+5-HD+SAP组心肌线粒体膜电位较DZ预处理组明显降低，但与SAP组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结果说明在SAP模型中，心肌细胞凋亡时线粒体功能变化，起重要作用的线粒体膜电位明显降低。
4）心肌细胞凋亡的情况
TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况，凋亡的严重程度以凋亡指数（ApoptosisIndex，AI）计算，SAP组较对照组明显升高（P<0.01）；DZ+SAP组与SAP组相比凋亡指数明显降低（P<0.01）；DZ+5-HD+SAP组凋亡指数较DZ+SAP组明显升高（P<0.05），但和SAP组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：
1）SAP时出现严重心肌损害，心肌细胞能量代谢障碍，线粒体膜完整性受损，心肌细胞凋亡明显增加，提示细胞凋亡可能是SAP心脏损害的重要机制之一。
2）DZ预处理可产生明显的预处理心肌保护效应，抵抗SAP引起的心肌缺血损伤，减少心肌酶的漏出，增强线粒体Na+-K+-ATPase酶活性从而防止线粒体内钙超载、维持基质体积稳定；可以保持线粒体膜完整性，减少膜电位丢失，抗心肌细胞凋亡。MitoKATP通道阻滞剂5-HD能明显抑制DZ的心肌保护效应，说明DZ的心肌保护效应与开放MitoKATP通道有关。
3）本课题通过对DZ预处理的研究，为SAP心肌保护提供了新的治疗思路，并为后处理应用于临床提供了重要的依据。
二、中药对SAP大鼠心肌保护的作用及其机制
目的：
研究中药参芪扶正注射液对SAP大鼠血清CK-MB、LDH、心肌Na+-K+-ATPase活性、心肌细胞线粒体膜电位、心肌细胞凋亡指数以及心脏病理损害等的影响，探讨中药参芪扶正注射液对SAP大鼠心肌保护的作用及机制。
方法：
健康清洁级雄性SD大鼠26只，随机分为三组：空白对照组（K组，6只）、SAP模型组（M组，10只）、参芪扶正注射液治疗组（S组，10只）。M组和S组均采用5％牛磺胆酸钠胆胰管内逆行注入的方法制作SAP模型。S组按2.5ml中药/100g体重，分两次分别于造模后8h和16h腹腔注射；K组和M组于相同时间点给予等量生理盐水腹腔注射。观察各组大鼠24小时死亡率；各组大鼠于术后24小时腹主动脉取血，检测血清CK-MB、LDH水平；取心肌组织，应用分光光度法测定Na+-K+-ATPase活性；分离心肌细胞线粒体，应用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化；采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况；留取部分心脏、胰腺组织行病理学检查。
结果：
参芪扶正注射液治疗组大鼠血清CK-MB、LDH、胰腺及心脏病理评分和心肌细胞凋亡指数均低于SAP模型组（P<0.01），但仍高于对照组（P<0.01）；Na+-K+-ATPase活性、线粒体膜电位没有降低的细胞比例高于SAP模型组（P<0，05），但仍低于对照组（P<0.01）。
结论：
在SAP早期应用补气养血中药参芪扶正注射液，能降低SAP大鼠血清CK-MB和LDH的含量，减轻心脏病理损害，初步证实了参芪扶正注射液对SAP的心肌保护作用；参芪扶正注射液能够增强线粒体Na+-K+-ATPase酶活性，稳定线粒体膜电位，减少心肌细胞凋亡，这为SAP早期应用补气养血中药进行干预提供了理论依据。
目的：
SAP胰外器官损伤中，心功能障碍较为常见，研究表明线粒体是心肌细胞内完成心肌保护的重要细胞器，MitoKATP通道在抗凋亡等心肌保护中起着重要作用。本实验采用MitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪预处理模拟心肌缺血预处理防止心肌的缺血损伤，在大鼠SAP心肌损伤模型上检测大鼠血清CK-MB、LDH、心肌细胞Na+-K+-ATPase活性、心肌细胞线粒体膜电位和心肌细胞凋亡指数等，研究MitoKATP通道开放对SAP心肌的保护作用及其可能机制。
方法：
健康清洁级雄性SD大鼠36只，随机分为四组，分别为：空白对照组（K组，6只）、SAP模型组（M组，10只）、DZ+SAP组（D组，10只）、DZ+5-HD+SAP组（H组，10只）。M组采用5％牛磺胆酸钠胆胰管内逆行注入的方法诱导SAP大鼠模型；D组给大鼠连续腹腔注射DZ（20 mg.kg-1.d-1）三天，第三天注射完DZ30min后进行5％牛磺胆酸钠胆胰管逆行注入，具体方法同M组；H组，即分别连续腹腔注射DZ（20 mg.kg-1.d-1）+5-HD（20mg.kg-1.d-1）三天，然后再进行5％牛磺胆酸钠胆胰管逆行注入；K组开腹后，翻动胰腺数次后关腹，不注射牛磺胆酸钠。观察四组大鼠24小时死亡率；四组大鼠于术后24小时腹主动脉取血，检测血清CK-MB、LDH水平；取心肌组织，应用分光光度法测定Na+-K+-ATPase活性；分离心肌细胞线粒体，应用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化；采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况；留取部分心脏、胰腺组织行病理学检查。
结果：
1）血清CK-MB、LDH的变化
与对照组相比，SAP组血清CK-MB、LDH含量显著增加，差异均有统计学意义（P<0.01），说明SAP可致心肌细胞损伤；DZ+SAP组CK-MB、LDH含量虽然高于对照组，但较SAP组明显降低（P<0.01），说明二氮嗪有抗心肌缺血作用；DZ+5-HD+SAP组血清CK-MB、LDH含量明显增加，与DZ组比较有显著差异（P<0.01），与SAP组比较差异无统计学意义，说明5-HD能阻断DZ的心肌保护作用。
2）心肌Na+-K+-ATPase活性的变化
分光光度法检测结果显示，SAP组心肌细胞的Na+-K+-ATPase活性较对照组显著降低（P<0.01），但DZ预处理组Na+-K+-ATPase活性较高，与SAP组相差明显（P<0.05）；而DZ+5-HD+SAP组心肌Na+-K+-ATPase活性较DZ预处理组明显降低（P<0.05），与SAP组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
3）线粒体膜电位的检测
利用阳离子绿色荧光染料罗丹明123检测线粒体膜电位变化，发现SAP组线粒体膜电位较对照组显著降低（P<0.01）；DZ预处理组心肌线粒体膜电位明显高于SAP组（P<0.05）；DZ+5-HD+SAP组心肌线粒体膜电位较DZ预处理组明显降低，但与SAP组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结果说明在SAP模型中，心肌细胞凋亡时线粒体功能变化，起重要作用的线粒体膜电位明显降低。
4）心肌细胞凋亡的情况
TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况，凋亡的严重程度以凋亡指数（ApoptosisIndex，AI）计算，SAP组较对照组明显升高（P<0.01）；DZ+SAP组与SAP组相比凋亡指数明显降低（P<0.01）；DZ+5-HD+SAP组凋亡指数较DZ+SAP组明显升高（P<0.05），但和SAP组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：
1）SAP时出现严重心肌损害，心肌细胞能量代谢障碍，线粒体膜完整性受损，心肌细胞凋亡明显增加，提示细胞凋亡可能是SAP心脏损害的重要机制之一。
2）DZ预处理可产生明显的预处理心肌保护效应，抵抗SAP引起的心肌缺血损伤，减少心肌酶的漏出，增强线粒体Na+-K+-ATPase酶活性从而防止线粒体内钙超载、维持基质体积稳定；可以保持线粒体膜完整性，减少膜电位丢失，抗心肌细胞凋亡。MitoKATP通道阻滞剂5-HD能明显抑制DZ的心肌保护效应，说明DZ的心肌保护效应与开放MitoKATP通道有关。
3）本课题通过对DZ预处理的研究，为SAP心肌保护提供了新的治疗思路，并为后处理应用于临床提供了重要的依据。
二、中药对SAP大鼠心肌保护的作用及其机制
目的：
研究中药参芪扶正注射液对SAP大鼠血清CK-MB、LDH、心肌Na+-K+-ATPase活性、心肌细胞线粒体膜电位、心肌细胞凋亡指数以及心脏病理损害等的影响，探讨中药参芪扶正注射液对SAP大鼠心肌保护的作用及机制。
方法：
健康清洁级雄性SD大鼠26只，随机分为三组：空白对照组（K组，6只）、SAP模型组（M组，10只）、参芪扶正注射液治疗组（S组，10只）。M组和S组均采用5％牛磺胆酸钠胆胰管内逆行注入的方法制作SAP模型。S组按2.5ml中药/100g体重，分两次分别于造模后8h和16h腹腔注射；K组和M组于相同时间点给予等量生理盐水腹腔注射。观察各组大鼠24小时死亡率；各组大鼠于术后24小时腹主动脉取血，检测血清CK-MB、LDH水平；取心肌组织，应用分光光度法测定Na+-K+-ATPase活性；分离心肌细胞线粒体，应用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化；采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况；留取部分心脏、胰腺组织行病理学检查。
结果：
参芪扶正注射液治疗组大鼠血清CK-MB、LDH、胰腺及心脏病理评分和心肌细胞凋亡指数均低于SAP模型组（P<0.01），但仍高于对照组（P<0.01）；Na+-K+-ATPase活性、线粒体膜电位没有降低的细胞比例高于SAP模型组（P<0，05），但仍低于对照组（P<0.01）。
结论：
在SAP早期应用补气养血中药参芪扶正注射液，能降低SAP大鼠血清CK-MB和LDH的含量，减轻心脏病理损害，初步证实了参芪扶正注射液对SAP的心肌保护作用；参芪扶正注射液能够增强线粒体Na+-K+-ATPase酶活性，稳定线粒体膜电位，减少心肌细胞凋亡，这为SAP早期应用补气养血中药进行干预提供了理论依据。