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研究背景外科急性感染是一个非常复杂的机制,既存在细菌对机体组织的损伤,又有细胞的坏死及炎症细胞的趋化侵润。在急性炎症反应中,中性粒细胞是免疫应答第一道防线,起着关键的作用。中性粒细胞是具有迁移、变形、粘附和吞噬功能。现今大多数学者认为,中性粒细胞具有很强的趋化作用,而对中性粒细胞起趋化作用的物质,称之为中性粒细胞的趋化因子。由于中性粒细胞细胞膜上有趋化因子受体,通过受体与趋化因子结合,激活膜上的钙泵,细胞向前方伸出片足,最终细胞向产生趋化因子部位迁移。当中性粒细胞与外源性异物接触后,将异物包围,形成含有异物的吞噬体或吞噬泡。中性粒细胞膜表面有IgG Fc受体和补体C3受体,可加速吞噬作用。被吞噬的异物裹有抗体和补体时,与中性粒细胞膜上的相应受体结合,而加强了细胞对它的吞噬作用,称为调理作用。同时,中性粒细胞本身细胞膜因为吞噬作用而紊乱,引起呼吸爆发,细胞耗氧量增加,产生大量的过氧化物及超氧化物等细胞毒性效应分子,在杀死吞噬的细菌等异物后,本身也死亡,成为脓细胞。中性粒细胞受到趋化因子作用迁移至病灶,并通过吞噬、调理作用及呼吸爆发等杀灭病原体及微生物,即为中性粒细胞在感染过程中发挥的最主要作用。其中,中性粒细胞趋化因子在启动免疫防御机制中至关重要。中性粒细胞死亡模式直接关系着炎症反应以及患者的预后：1)中性粒细胞不能及时清除坏死细胞会导致脓肿和周围组织损坏,并吸引更多的中性粒细胞；而提高中性粒细胞凋亡率,可明显缓解这一现象。2)巨噬细胞的吞噬是清除死亡中性粒细胞是一个重要的途径,其清除的快慢与粒细胞凋亡的程度呈正相关。3)中性粒细胞是急性炎症反应的先锋军。在外科急性感染中,中性粒细胞是主要的效应细胞,其死亡模式,会影响感染恢复快慢以及预后。目的本研究通过实验室对中性粒细胞与坏死细胞关系的初步研究,以取得一些比较重要的资料,其后通过急性阑尾炎的临床研究,得出相类似的数据,同时为此类外科急性感染患者的抗感染治疗选择、手术时机、手术方式及预后提供决策依据。方法实验室分离液分离中性粒细胞及PBMC,通过56℃水煮法制作PBMC细胞坏死,并通过CFSE标记以及CD15染色中性粒细胞,再用transwell证明坏死细胞对中性粒细胞的趋化性。CFSE染色坏死细胞与新鲜中性粒细胞共同培养1-24小时,通过流式细胞仪及凋亡坏死检测试剂盒观察中性粒细胞吞噬坏死细胞情况及吞噬后死亡情况。通过比较10例正常志愿者与10例20-40岁急性阑尾炎患者在感染期及恢复期中性粒细胞的吞噬功能与活性情况,证明中性粒细胞在感染中的地位与作用。结果通过流式细胞仪,初步证明坏死细胞趋化中性粒细胞。中性粒细胞吞噬坏死细胞后会死亡,其死亡方式受时间及吞噬效果影响对于急性阑尾炎的研究,由于其他细胞可能干扰实验的准确性,分离液分离的中性粒细胞纯度较低,仅有80%；而使用磁珠分选的中性粒细胞的纯度可达94.5%。在中性粒细胞分离中使用了磁珠分离,更好的保证了实验的准确性。急性阑尾炎患者在感染期,中性粒细胞存活时间明显长于恢复期及健康志愿者,在体外培养72小时候,急性阑尾炎恢复期患者及健康志愿者的中性粒细胞已经有70%左右发生死亡,而感染组仅有6.5%发生死亡。这可能与感染期中性粒细胞多为骨髓新生细胞有关。进一步分析了各组细胞在功能上的关系,发现感染组中性粒细胞的吞噬速度较恢复期组及健康志愿者组快在2小时就达到了吞噬高峰而其他两组在4小时才达到了吞噬高峰。在吞噬强度上各组也存在区别,感染组有9.27%的中性粒细胞发生了吞噬,而其他组中性粒细胞的吞噬率仅为6%左右。各组中性粒细胞吞噬珠子以后,死亡方式也各不相同。感染组中性粒细胞吞噬珠子后细胞多发生凋亡,而恢复期组及健康组多发生坏死。以4小时为例,检测各组细胞凋亡率发现：感染期组吞噬珠子的细胞凋亡率为81.45%,而恢复期及健康组凋亡率为30.34%,坏死率达到了63.5%。结论1、坏死细胞对中性粒细胞有趋化作用2、中性粒细胞的死亡模式受坏死细胞影响,若坏死细胞数量过多,难以被中性粒细胞完全吞噬清除,则中性粒细胞以坏死为主。随着时间的进展及对坏死细胞的清除,中性粒细胞最终坏死与凋亡趋于稳定,并以细胞凋亡为主。3、急性阑尾炎,是外科急诊中的常见疾病之一,而中性粒细胞在急性阑尾炎诊断和治疗中扮演了重要角色。通过分析急性阑尾炎中性粒细胞不同时期细胞功能的变化,进一步分析其在疾病发生发展中的作用。通过研究探讨为何感染期中性粒细胞存活时间较长,其吞噬能力增强的原因等等。最终阐明急性阑尾炎感染期中性粒细胞的功能特点,为临床诊断和治疗提供更好的理论指导和支持。