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目的1.动态观察低剂量亚慢性砷染毒家兔在染毒不同时间的肝脏损伤情况。2.建立不同剂量砷染毒SD大鼠的动物研究模型,研究亚砷酸钠染毒SD大鼠和正常SD大鼠肝脏蛋白质组双向电泳图谱及表达的差异蛋白点,进一步阐明低剂量染砷对肝脏损伤的机制,寻找低剂量砷中毒的生物标志物,为早期砷中毒防治提供一些科学依据。方法1.成年家兔12只,随机分为四组,即对照组(0μg/L),低剂量染毒组(10μg/L),中剂量染毒组(50μg/L),高剂量染毒组(250μg/L)。染毒8周,12周后用SYSMEX-180型全自动生化仪分别测定各组家兔血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、r-谷氨酰基转移酶(r-GT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLP)等含量。染毒12周末处死家兔,测定肝脏脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、肝脏超氧化物歧化酶(SOD),且染色观察肝脏的病理组织变化。原子荧光吸收光谱法测定肝脏和胆汁的总砷含量。2.成年SD大鼠48只,随机分为四组,每组12只,即对照组(0μg/L),低剂量染毒组(50μg/L),中剂量染毒组(150μg／L),高剂量染毒组(450μg/L)。染毒4周后处死大鼠,观察指标为：体重、主要脏体比。原子荧光吸收光谱法测定血砷和肝脏砷。运用双向凝胶电泳寻找鉴定染毒SD大鼠和正常SD大鼠肝脏蛋白质组差异表达。采用SPSS13.0统计软件进行分析。结果1.家兔体重变化：染毒组体重和对照组体重随观察时间的延长而增加,但是10μg/L剂量体重增长较其他剂量组更为明显。2.家兔肝脏相关血清酶学指标变化：250μg/L组染毒8W,AST与同期对照组相比升高(P<0.05),12W时,AST和ALP均升高(P<0.05)。；50μg／L组染毒12W,ALT、ALP、γ-GT与同期对照组相比升高(P<0.05);10μg/L组AST、ALT、ALP、γ-GT在整个染毒过程中均未出现明显改变。3.家兔肝脏相关血清蛋白质变化：随着染毒剂量和时间的增加各剂量组的总蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比与同期对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。4.家兔肝脏脂质过氧化指标变化：随着染毒剂量的升高MDA水平升高,SOD活性降低且150μg/L、450μg/L剂量组MDA水平显著高于对照组(P<0.05)；150μg/L、450μg/L剂量组SOD活性显著低于对照组(P<0.05)5.家兔肝脏镜下观察：光镜下,对照组肝小叶的结构完整,无肝细胞的坏死及炎性细胞浸润。10μg/L剂量组少见中央静脉充血,50μg/L剂量组除有静脉扩张充血外,多见肝细胞的边界不清,排列紊乱。250μg／L剂量组中央静脉周肝细胞消失,代之明显增生的纤维细胞及多量的胶原。残存的肝细胞排列略有紊乱,偶见肝窦略有扩张。6.家兔体内砷含量变化：随着染毒剂量的升高肝脏砷和胆汁砷也增高,且与对照组相比250μg/L剂量组胆汁砷含量增加(P<0.05)。7.大鼠主要脏体比：与对照组相比,50μg/L剂量组的肝体比、心体比和肾体比均增加(P<0.05)；肝脏体比150μg/L剂量组与对照组相比也增加(P<0.05)；各染毒组肺体比、脾体比、脑体比与对照组相比无明显变化。8.大鼠肝脏组织中蛋白双向凝胶电泳的结果：8.1与对照组相比,50μg/L剂量组不表达的点有31个,表达下调的点有11个,表达上调的点1个。8.2与对照组相比,150μg/L剂量组不表达的点有23个,表达下调的点有15个,没有出现表达上调的点。8.3与对照组相比,450μg/L剂量组没有出现不表达的点,表达下调的点有8个；表达上调的点1个。结论1.本研究中,肝脏相关血清酶含量、分泌型蛋白合成以及病理组织检测结果显示,10μg/L剂量染毒对家兔的肝脏没有产生明显的毒性,而10μg／L这个剂量家兔的体重增长比较明显。2.50μg/L和250μg/L剂量组家兔肝脏相关血清酶升高,其中AST的变化出现在染毒的8W,较其他相关血清酶学变化出现的早,说明在肝脏相关血清酶学中,AST是较为早期的反映砷染毒肝脏损伤的敏感指标。肝脏中央静脉充血及不同程度的肝细胞排列紊乱,尤其是250μg/L可见胶原和纤维细胞增生。本实验的染毒剂量下,没发现对肝脏蛋白质合成造成影响。3.肝脏的脂质过氧化,50μg／L及以上剂量组肝脏出现明显的脂质过氧化损伤有关,且随着染毒剂量的增加而逐渐加重。同时也提示,50μg/L及以上剂量组肝脏轻度的组织病理学的改变和血清酶含量的变化可能和肝脏的脂质过氧化损伤有关。4.家兔和大鼠体内砷含量检测显示,砷在肝脏和血液中蓄积,且肝脏砷通过肝脏代谢后,经由胆汁排泄。5.50μg/L剂量大鼠的肝体比、心体比和肾体比均升高,说明50μg/L剂量砷染毒除肝脏外,对心脏和肾脏也有一定的毒性作用。6.差异蛋白本研究获得了分辨率较高、重复性较好的砷染毒大鼠肝脏双向凝胶电泳图谱,结果显示各剂量组肝脏蛋白表达量有不同程度的差异,染毒组肝脏差异蛋白主要表现为表达下调或不表达：染毒50μg/L剂量和150μg/L剂量不表达和表达下调的蛋白点较多,其中重复不表达的和重复表达下调的蛋白点居多数,且多数居于胶条的碱性端,分别是点4301、4303、4904、4905、5505、6003、8001、8103、8302、8303、8404、8703、9001、9201、9301、0003、1601、3603、4202、7403、7501、7601、0603、7203。这些重复的碱性蛋白点可能和砷致肝脏损伤有密切的联系。