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目的:在结肠癌细胞系、手术组织和病理切片,检测丝精氨酸蛋白激酶SRPK1的表达水平,分析SRPK1的表达与结肠癌临床病理分级及患者不良预后的相关性,明确SRPK1增强结肠癌细胞抗凋亡能力的生物学功能,揭示SRPK1激活NF-κB通路促进结肠癌抗凋亡的分子机制。方法:1、Western Blotting和实时荧光定量PCR方法分析SRPK1在6株结肠癌细胞系和5对结肠癌临床组织中蛋白及mRNA水平的表达。免疫组化检测347例结肠癌病理切片中SRPK1的表达水平。采用SPSS19统计软件,卡方检验分析SRPK1的表达与结肠癌临床病理分级及TNM分期的相关性,Kaplan-Meier法分析SRPK1的表达水平与结肠癌生存预后的相关性(p≤0.05具有统计学意义)。2、在结肠癌细胞SW480和HCT-116中构建SRPK1高表达和SRPK1沉默表达的稳定细胞株。应用SRPK1高低表达的结肠癌细胞模型,MTT比色法检测细胞存活能力,Annexin V/FITC检测细胞抗凋亡能力,Western Blotting检测抗凋亡蛋白Bcl-2以及Caspase-和PARP活性切割片段的表达水平。3、应用SRPK1高低表达的结肠癌细胞模型,qPCR和双荧光素酶报告基因分析NF-κB下游靶基因的转录水平和转录活性,免疫荧光和Western Blotting检测NF-κB/p65在结肠癌细胞的定位及IKKβ和IκBα的总蛋白水平和磷酸化水平。4、10μM SRPK1抑制剂SRPIN340抑制SRPK1后,MTT比色法和Annexin V/FITC检测结肠癌稳定细胞株的生存能力和抗凋亡能力。采用裸鼠皮下成瘤实验,将构建的SW480稳定细胞系注入裸鼠皮下,分别比较PBS组、阿霉素组,阿霉素和SRPIN340组小鼠成瘤的大小。结果:1、SRPK1在结肠癌6株细胞系SW480,HCT-116,HT-29,HCT-8,Caco2,LS174T2、中的蛋白表达水平明显高于正常结肠细胞系NCM-460;在5对癌和癌旁临床组织中,SRPK1在癌组织的表达水平高于癌旁组织;免疫组化实验和SPSS分析结果表明,SRPK1的表达水平与结肠癌的恶性程度和结肠癌病人预后不良显著相关。3、在SPRK1稳定高低表达的结肠癌细胞株中,SRPK1过表达的细胞株生存、抗凋亡、Caspase-3和PARP的活性切割片段以及Bcl-2表达水平均高于对照组细胞。SRPK1沉默表达的细胞则获得相反实验结果。4、在SPRK1稳定高低表达的结肠癌细胞株中,SRPK1的高表达可以增强NF-κB的转录活性和下游靶基因的转录水平,上调IKKβ的磷酸化水平,促进IκBα降解和NF-κB/p65的核转位。5、SRPIN340可以部分抑制SRPK1高表达细胞株的抗凋亡能力,但是在裸鼠实验中,SRPIN340对成瘤抑制效果不明显,表明SRPK1可以作为癌蛋白调控结肠癌细胞抗凋亡。结论:SRPK1的高表达与结肠癌的恶性程度和病人预后不良密切相关;上调SRPK1的表达可以增强结肠癌细胞的抗凋亡能力;SRPK1可以提高IKKβ的磷酸化水平,促进IκBα降解和NF-κB/p65核转位,从而增强NF-κB的转录活性。