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在生物活性追踪指导下,对放线菌A19菌株发酵液中的抑菌活性成分进行了分离和结构鉴定,并对活性化合物进行了抑菌活性测定。主要研究结果如下:
(1)采用大孔树脂吸附法、溶剂萃取法、硅胶柱层析法和HPLC制备技术从放线菌A19菌株发酵液中分离得到4个化合物H-1、H-2、H-3和H-4。经结构鉴定:化合物H-1为环(脯氨酸.亮氨酸),化合物H-2为环(4-羟基-脯氨酸-亮氨酸),化合物H-3因量少只做了EIS-MS,化合物H-4的结构式在解析之中。
(2)采用滤纸片法和抑制孢子萌发法测定了化合物H-1、H-2、H-3和H-4的抗细菌和抗真菌活性,结果表明:化合物H-1对供试的5种病原真菌和6种病原细菌无明显的抑菌作用。化合物H-2抑菌活性较差,当剂量为5μg时对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的抑菌圈直径分别为6.5mm和6.0mm,对5种供试病原真菌孢子的抑制萌发中浓度EC50值都在1 000μg/ml以上。化合物H-3和H-4对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡状芽孢杆菌、白菜软腐病菌(Erwinia carotovora)均有很好的抑菌活性,当剂量为5μg时H-3和H-4的抑菌圈直径可分别达到23.5mm、14.0mm、13.5mm、16.0mm和13.5mm、11.0mm、12.5mm、14.0mm,且所有抑菌圈均透明;对大肠杆菌(Escherichia coli)和铜绿假单孢杆菌(Pseudomonas aeruginosa)无抑菌效果。化合物H-3和H-4对玉米大斑病菌(Exserlhilum turcicum)孢子的毒力最强,抑制孢子萌发的中浓度EC50值分别为31.7μg/ml和87μg/ml,对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、玉米弯孢叶斑病菌(Curvularia lunata)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)和马铃薯干腐病菌(Fusarium solani)孢子的EC50值分别为38.6μg/ml、71.0μg/ml、50.2μg/ml、42.7μg/ml和123μg/ml、173μg/ml、154μg/ml、130μg/ml。