【摘 要】
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该文首先建立了分光光度法测定CHO细胞内ATP浓度,邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法测定胞内氨基酸浓度,以及利用离子色谱和抑制电导检测器同时分离检测TCA循环中有机酸浓度
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该文首先建立了分光光度法测定CHO细胞内ATP浓度,邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法测定胞内氨基酸浓度,以及利用离子色谱和抑制电导检测器同时分离检测TCA循环中有机酸浓度的方法.葡萄糖脉冲培养中,当葡萄糖浓度低于0.54mmol/L时,部分氨基酸比消耗速率的增加主要是这些氨基酸参与分解代谢为细胞提供能量;谷氨酰胺脉冲培养中,当谷氨酰胺浓度低于0.40mmol/L时,部分氨基酸比消耗速率的增加主要是这些氨基酸参与细胞的生物合成.与谷氨酰胺相比,葡萄糖浓度对胞内ATP浓度的影响较大,是能量的主要提供者.在批培养中,葡萄糖的耗尽导致CHO细胞迅速死亡,谷氨酰胺耗尽时CHO细胞仍能维持生长.通过胞内有机酸浓度测定发现,CHO细胞TCA循环中的有机酸主要来自于谷氨酰胺代谢;异柠檬酸浓度的偏低表明柠檬酸反应生成异柠檬酸的流量很小.
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