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鸭病毒性肝炎（Duck Viral Hepatitis，DVH）是由鸭肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus，DHV）引起的一种传播迅速、致死率高的传染病。DHV为小核糖核酸病毒科，禽肝炎病毒属。该病在全世界广泛分布流行，主要流行的病原是DHV-Ⅰ。目前，国内外对该病的检测方法主要采用中和试验、酶联免疫吸附试验、琼脂免疫扩散试验。本研究通过生物学软件对VP1基因编码的蛋白进行了抗原性分析，将VP1蛋白分成了抗原性较强的五段，以重组阳性质粒pEasy-VP1为模板，经PCR反应扩增得到了长度在230~720bp之间的VP1-a~e/VP16个基因片段，连入pET-32a(+)表达载体中，将各重组的表达载体分别转入大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)pLysS中进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳分析，各段蛋白均获得了表达，与预期结果相符，且VP1-c为可溶性表达，并用亲和层析的方法对表达的蛋白进行了纯化，SDS-PAGE电泳分析表明，目的蛋白获得了高效的纯化。Western blot分析表明，截短蛋白VP1-c（80-150aa）抗原性良好。用纯化的截短蛋白VP1-c作为包被抗原建立间接ELISA方法，分别对抗原和血清的稀释度、抗原包被条件、封闭条件、酶标抗体稀释度、各步反应时间等条件进行了优化，最后确定了间接ELISA方法最佳工作条件和浓度即：截短蛋白VP1-c包被浓度为2μg/mL，DHV抗血清稀释度为1:20，包被液为0.05mol/L碳酸盐缓冲液（pH=9.6），作用条件和时间为37℃作用1h后4℃过夜，封闭液为5%脱脂乳，作用条件和时间为37℃封闭90min，被检血清作用条件和时间为37℃60min，酶标二抗稀释浓度为1:15000，作用条件和时间为37℃60min，最佳底物显色时间37℃10min。确定了该ELISA检测方法的临界值为0.208，最低检出量为1:640，批内重复性试验变异系数在0.42%～8.12%，批间重复性试验变异系数在1.44%～8.83%，表明该方法具有良好的重复稳定性。用建立的ELISA检测方法对常见的几种鸭病阳性血清：鸭病毒性肠炎、鸭源小鹅瘟、鸭减蛋综合征、鸭源禽流感进行检测，结果均为阴性，表明该ELISA检测方法具有良好的特异性。应用建立的ELISA方法对48份鸭血清进行了检测，与中和试验相比较，符合率为86.9%。说明本方法可初步应用于鸭肝炎抗体的检测，为我国鸭肝炎病毒的检测和血清流行病学调查提供了有效的技术支持。