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目的: 1.研究清热化瘀方对盆腔子宫内膜异位症(瘀热互结型)疼痛的临床疗效。通过观察治疗前后痛经、非经期盆腔痛、内诊痛、中医证候积分,及血清ICAM-1、PGF2α、OT的变化,评价治疗作用。体现“清热化瘀、疏利冲任”的治法治则。 2.观察不同剂量清热化瘀方对EMT模型大鼠血清TNF-α、VEGF、NGF;异位内膜组织NF-κB蛋白因子及VEGF mRNA、NGF mRNA、TNF-α mRNA、NF-κ B mRNA、miRNA-126表达的影响,研究清热化瘀方对NF-κB及其下游因子的调控作用,论述中药治疗子宫内膜异位症相关性疼痛的分子机制。 3.研究异位组织中miRNA-126与VEGF mRNA的相关性,探讨microRNA对子宫内膜异位症炎症、血管生成的调控及清热化瘀方的干预作用。 方法: 1.采用随机、对照临床试验研究方法,收集子宫内膜异位症(瘀热互结型)疼痛患者117例:清热化瘀方组60例,血府逐瘀胶囊组57例。观察治疗前后疼痛、中医证候积分,ELISA法检测血清ICAM-1、PGF2α、OT变化以评价临床疗效。 2.采用自体手术移植法建立子宫内膜异位症SD大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、孕三烯酮组、清热化瘀方低、中、高剂量组,并另设假手术组,每组8只。灌胃给药。药物干预21天后肉眼观察大鼠腹壁移植物生长情况,测量计算移植物体积。显微镜观察大鼠异位内膜组织结构病理学改变。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清TNF-α、VEGF、NGF及异位内膜组织中NF-κB蛋白因子含量。RT-PCR法检测各组大鼠异位组织中VEGF mRNA、TNF-α mRNA、NGF mRNA、NF-κB mRNA、miRNA-126相目对含量。 结果: 临床研究: 1.清热化瘀方能明显改善盆腔子宫内膜异位症患者痛经程度,总有效率为91.67%,其疗效显著优于血府逐瘀胶囊(△P#<0.05)。 2.清热化瘀方在一定程度上改善子宫内膜异位症非经期盆腔疼痛(P*<0.05)。尤其在非经期下腹痛和排便痛两方面疗效显著优于血府逐瘀胶囊(△P#<0.05)。 3.清热化瘀方能改善盆腔子宫内膜异位症疼痛体征(触痛、扳机点压痛)(P*<0.05),总有效率为71.67%,其缓解疼痛作用优于血府逐瘀胶囊(P#<0.05)。 4.清热化瘀方能明显改善瘀热证证候,其总有效率为96.67%。在改善主症证候(经前经期小腹灼热疼痛、月经量多血块经期延长、非经期小腹隐痛、阴中干涩、性交痛)上显著优于血府逐瘀胶囊(△P#<0.05)。 5.清热化瘀方治疗疼痛机制可能通过降低血清ICAM-1、PGF2α和OT浓度(P*<0.05),在降低血清ICAM-1、PGF2α水平上显著优于血府逐瘀胶囊(△P#<0.05)。 实验研究: 1.与模型组比较,治疗组移植物体积明显缩小(△P<0.05),囊状物萎缩,内有少许透明囊液,呈淡黄色或暗红色,其周边血管和粘连带不明显。中药中、高剂量组与孕三烯酮组移植物体积无统计学差异(#P>0.05)。组织病理学上见异位内膜萎缩,腺体数目减少,腺腔缩小,间质细胞小而稀疏。 2.ELISA结果:①与模型组比较,孕三烯酮组、中药低、中、高剂量组中VEGF、TNF-α、NGF、NF-κB含量低于模型组,差异有统计学意义(△P<0.05)。②与孕三烯酮组比较,中药中、高剂量组中VEGF水平与之差异无统计学意义(#P>0.05);中药高剂量组中TNF-α、NF-κ B水平与之差异无统计学意义(#P>0.05);中药中剂量组中NGF水平与之差异无统计学意义(#P>0.05),中药高剂量组中NGF水平显著低于孕三烯酮组(※P<0.05)。 3.RT-PCR结果:①与模型组比较,孕三烯酮组、中药低、中、高剂量组中VEGFmRNA、TNF-αmRNA、NGF mRNA、NF-κB mRNA相对含量低于模型组,miR-126b含量高于模型组,差异有统计学意义(△P<0.05)。②与孕三烯酮组比较,中药中剂量、高剂量组中VEGF mRNA、NGFmRNA相对含量与之差异无统计学意义(#P>0.05)。中药高剂量组中TNF-α mRNA、NF-κ B mRNA相对含量与之差异无统计学意义(#P>0.05)。中药低、中、高剂量组中miR-126b含量均低于孕三烯酮组(※P<0.05)。③中药低、中、高剂量组和模型组异位内膜组织(EC)中miR-126b相对含量显著低于正常内膜组织(EU)(▲P<0.05),且在异位组织中与VEGF mRNA相对含量呈负性相关,r=-0.873(P<0.05)。 结论: 1.朱南孙教授从“瘀、热”论治子宫内膜异位症,立清热化瘀治法治则,能有效改善盆腔子宫内膜异位症(瘀热互结型)患者的临床疼痛症状和体征、瘀热证证候,降低血清ICAM-1、PGF2α和OT含量,缓解盆腔疼痛,值得临床推广。 2.在实验性子宫内膜异位症大鼠模型上,清热化瘀方可能通过降低NF-κB及其下游因子VEGF、TNF-α、NGF的转录和释放,减轻炎症反应,抗血管、神经生成,治疗炎症性疼痛。 3.miRNA可能在分子水平参与调节EMT的发生、发展。异位组织中miR-126和VEGF mRNA呈负相关表达,参与子宫内膜细胞间血管生成与炎症损伤。清热化瘀方可能通过上调miR-126,靶向抑制病灶形成和疼痛产生。