论文部分内容阅读
抗体具有特异识别抗原分子的能力,被广泛的运用于科学研究和临床诊断和治疗的各个领域。传统的抗体制备只能利用纯化的抗原免疫动物获取免疫血清或是利用杂交瘤细胞产生单克隆抗体。随着基因工程技术和抗体展示技术的出现,越来越多的科学家开始从抗体展示文库中筛选新抗体。十几年间,噬菌体展示技术,核糖体展示技术和酵母展示技术已经成为抗体筛选和蛋白质工程的主流技术平台。
疾病细胞表面抗原是重要的临床诊断标志和治疗靶点。由于缺乏翻译后修饰或不正确的蛋白质折叠,用生物工程制备的抗原常常不能生产出优异的检测或治疗抗体。针对这一问题,我们利用新近发展的一种细菌展示系统,Anchoredperiplasmicexpression(APEx),利用免疫一种HMEC-hTERTT5肿瘤细胞的小鼠脾细胞构建了>5*106的免疫文库。以HMEC-hTERTT5肿瘤细胞为目标,经过四轮平板筛选,对人细胞膜表面的抗原进行亲和筛选,富集了一组特异识别细胞表面抗原的抗体。下一步将逐个克隆鉴定特异结合肿瘤细胞但不结合正常细胞的抗体。
采用细菌展示系统对蛋白质或多肽抗原进行表面展示,能够增强被展示抗原的免疫原性,增强动物对其的免疫反应,更有效的产生抗体。细菌原生质体展示系统是现在展示效率最好的细菌展示系统,本研究发现,细菌原生质体展示的hTNFa具有较高的免疫原性,能够诱导小鼠对目的抗原产生了较强的特异抗体响应。免疫过程不需要蛋白纯化,也不需要添加佐剂,大大方便了抗原的免疫。