鸡胚肠组织细胞培养及益生菌抗NDV作用研究

• 作 者: 王占锋
• 机 构: 东北农业大学
• 出 处: 东北农业大学
• 发表日期: 2010年01期
• 关键词: 益生菌 鸡胚肠组织细胞 病毒抑制率 HA 抗病毒作用

已有的研究证实益生菌具有抑制轮状病毒和HIV所致腹泻的作用,但益生菌的抗病毒作用尚缺乏系统研究。因此,本实验采用MTT和NDV-HA方法,分别在体外、鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肠组织细胞上初步评价了益生菌对NDV血凝价和抑制率的影响,从而探讨益生菌的抗病毒作用并分析其可能的机制。实验中首先利用革兰氏染色方法检测了益生菌对CEF和鸡胚肠组织细胞的黏附能力,结果确定益生菌对CEF具有一定的黏附能力,但明显低于对鸡胚肠组织细胞黏附能力;利用MTT法测定益生菌处理后的细胞活性,经统计分析得出益生菌对细胞的最大无毒浓度为干酪乳杆菌1011cfu/ml,嗜酸乳杆菌1012cfu/ml,益生菌培养上清1:2的稀释液,益生菌灭活菌体和破碎菌体成分在实验浓度均未显现细胞毒害现象;利用药敏试验筛选出对干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌均高度敏感的抗生素—庆大霉素。然后,根据上述实验结果进行了细胞上的益生菌抗病毒研究。实验分组如下:第1组:益生菌与上述2种细胞预先分别孵育后再攻毒;第2组:2种细胞感染病毒后再接入益生菌;第3组:益生菌与病毒同时接入细胞;第4组:益生菌对照;第5组:病毒对照;第6组:正常细胞对照。结果显示:在体外益生菌对NDV血凝价影响的实验中,所选择的5种益生菌及其培养上清都极显著地降低了NDV的血凝价,但各菌种之间存在程度不同的差异;而实验中选择的2种致病菌及其培养上清对NDV的血凝价均没有影响,这一结果说明益生菌可能具有直接破坏病毒的作用,并且具有菌种特异性。以MTT法测定益生菌和NDV处理后的细胞活性,通过公式计算病毒抑制率,结果显示,无论是在CEF上,还是在鸡胚肠组织细胞上,益生菌都可以显著的提高对NDV的抑制率,并且益生菌的这种作用具有量效关系和时效关系。益生菌-细胞-NDV相互作用后的细胞培养上清中NDV血凝价的变化结果显示,益生菌及其培养上清与NDV同时接入细胞可以极显著的降低NDV的血凝价,推测其可能具有直接的杀灭病毒作用。在实验中,我们分别研究了益生菌活菌、培养上清、灭活菌体和破碎菌体成分的抗病毒作用,结果表明,益生菌的各种形式均具有一定的抗病毒作用,但在效果上存在一定的差异,原因可能是其抗病毒作用的机制不同。益生菌与细胞作用后再感染病毒,对NDV抑制率升高的结果反映出了益生菌对NDV吸附细胞的阻断作用;从益生菌与病毒同时接入细胞后降低病毒对细胞侵害的现象,可以看出益生菌可能对病毒结构具有直接破坏作用;细胞感染病毒后再接入益生菌对NDV抑制率极低的现象说明,病毒感染后益生菌再很难发挥作用。综上所述,益生菌对NDV的抗病毒作用可能是多方位的,既具有对NDV的直接破坏作用,又可以阻断病毒对细胞的感染、抑制病毒在细胞内的增殖。