【摘 要】
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目的研究云南省大理州云龙、凤仪、南涧、剑川等18个野生变家种滇重楼品质及主要有效成分差异,初步探讨大理凤仪东山、云龙团结大登、云龙青松和洱源右所起胜4个种植基地滇重楼品质与其根际土壤细菌的相关性。方法采用HPLC及UPLC-ESI-Q-TOF-MS技术对不同种植基地野生变家种滇重楼品质评价及主要有效成分差异进行分析,运用微生物学纯培养手段及16S r DNA测序技术对滇重楼根际土壤细菌进行物种分离
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目的研究云南省大理州云龙、凤仪、南涧、剑川等18个野生变家种滇重楼品质及主要有效成分差异,初步探讨大理凤仪东山、云龙团结大登、云龙青松和洱源右所起胜4个种植基地滇重楼品质与其根际土壤细菌的相关性。方法采用HPLC及UPLC-ESI-Q-TOF-MS技术对不同种植基地野生变家种滇重楼品质评价及主要有效成分差异进行分析,运用微生物学纯培养手段及16S r DNA测序技术对滇重楼根际土壤细菌进行物种分离、纯化与鉴定。结果1.18个不同种植基地野生变家种滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H以及薯蓣皂苷7个活性成分含量差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)。除剑川马登、南涧乐秋和云龙关平外,其它种植基地滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量(0.4594-2.9674%mg/g)均达到了《中国药典》2015版0.6%的限量标准。不同种植基地滇重楼根茎HPLC指纹图谱共得到22个共有峰,相似度较高(0.907-0.988),各共有峰的相对保留时间RSD值较小(0.06%-2.55%),而相对峰面积的RSD值则较大(3.80%-105.90%)。2.超高效液质联用技术(UPLC-MS)在正离子模式下对16个不同种植基地野生变家种滇重楼根茎和叶中甾体皂苷类成分进行定性检测,鉴定出重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅷ、G、D、H、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、Pseudoproto-pb、Pariyunnanoside B和Tg 13种主要有效成分。根据PCA模型,滇重楼根茎中主成分可聚为2类,主要差异峰为0.53min(m/z 130.500)、6.53 min(m/z 366.500);滇重楼叶中主成分可较好的聚集在一起,主要差异峰为45.53 min(m/z 398.5000)、36.53 min(m/z 396.500,412.500)、6.53 min(m/z 366.500)。3.从4个种植基地的滇重楼植物根际土壤中共分离、纯化、鉴定得到了12属74株菌,包括4属23株放线菌和8属51株细菌。其中,在大理凤仪东山滇重楼植物根际土壤中共分离鉴定得到2属2株放线菌和2属9株细菌;在云龙团结大登滇重楼植物根际土壤中共分离鉴定得到1属6株细菌;在云龙青松中滇重楼植物根际土壤中共分离鉴定出4属20株放线菌和7属29株细菌;在洱源右所起胜中滇重楼植物根际土壤中共分离鉴定出1属1株放线菌和2属7株细菌。4个不同种植基地野生变家种滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H以及薯蓣皂苷的含量差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),S19(云龙团结大登)滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量最高(1.9975%mg/g),S22(洱源右所起胜)次之(1.9892%mg/g)。结论1.上述18个不同种植基地野生变家种滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H以及薯蓣皂苷的含量差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),HPLC指纹图谱相似度较高,滇重楼品质较好。2.上述16个不同种植基地野生变家种滇重楼根茎和叶中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅷ、D、H、G、Pseudoproto-pb、Pariyunnanoside B、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、Tg 13种甾体皂苷类主要有效成分分布差异较大;不同种植基地野生变家种滇重楼根茎中PCA主成分差异较大,叶中主成分差异较小。3.上述4个种植基地的野生变家种滇重楼根际土壤中放线菌微单孢菌属(Micromonospora)以及非放线菌肠杆菌属(Enterobacter)、泛菌属(Pantoea)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)菌株与滇重楼的品质具有一定的相关性,这些菌株有促进滇重楼根茎中有效成分合成的可能性。
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