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【背景】肿瘤生长分为血管期和血管前期,在血管前期,肿瘤细胞主要依赖弥散作用获取营养,当实体瘤达到1～2mm~3、细胞数达到10~7左右时,其继续生长就必须要由新生血管来提供足够的氧及营养物质。肿瘤内部血管化后,其体积将迅速增大。肿瘤的转移受多种因素的影响,其中经血道转移是肿瘤发生远位播散的重要途径,因此肿瘤血管的生成在肿瘤转移上发挥了很重要的作用。血管生成在肿瘤生长和转移上的重要作用使得阻断血管生成成为一种可行的肿瘤治疗方法。目前临床常用的抗血管生成化疗是小剂量、高频率的给药模式,将常规剂量周期性的传统化疗改为连续性或高频率低剂量抗血管生成化疗治疗耐药性肿瘤可提高疗效且减低毒性。由于肿瘤组织内新生的毛细血管内皮细胞属于正常细胞范畴,遗传学稳定,不易出现耐药现象。恩度(Endostar/YH-16)是中国烟台麦得津生物工程股份有限公司开发的新型重组人血管内皮抑素(rh-endostatin),临床前研究结果显示该药能抑制血管内皮细胞增殖、血管生成和肿瘤生长。Ⅰ、Ⅱ期临床试验结果证明该药单药临床应用安全有效。中医药治疗肿瘤具有独到的疗效。近年来发现某些中药制剂及中药来源的药物有抗血管新生作用,如人参皂甙Rg3、红素(雷公藤中提取的一个活性单体成分)、羟基喜树碱、紫杉醇等。【目的】本实验旨在国内外现有的研究基础上采用体内、体外两种典型的实验方法探讨(1)不同浓度的重楼、白头翁醇提物与汉防己甲素单药及联合恩度体外对血管内皮细胞的增殖抑制作用,对细胞迁移、小管形成的抑制作用,以及对凋亡和周期的影响:(2)不同浓度的重楼、白头翁醇提物与汉防己甲素单药及联合体内对鸡胚尿囊膜血管新生的抑制作用。【方法】采用MTT法观察中药重楼、白头翁醇提物与汉防己甲素单药及联合恩度对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、人结肠癌Lovo细胞增殖的影响;采用transwell趋化实验、体外小管形成实验,观察中药重楼、白头翁醇提物与汉防己甲素单药及联合恩度对内皮细胞迁移以及体外小管形成的影响;采用Annexin V荧光染色、细胞周期检测试剂盒和流式细胞仪(FCM)检测药物作用对细胞凋亡和周期的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察中药重楼、白头翁醇提物与汉防己甲素单药及联合恩度对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。【结果】1.15～60μg/ml重楼醇提物、2～8μg/ml白头翁醇提物、2～8μg/ml汉防己甲素具有抑制肉皮细胞增殖的作用,细胞存活率分别在65%-18.2%、78.4%-28%、84.3%-46.9%之间,联合10μg/ml恩度时,细胞存活率分别在44.5%-8.9%、37.6%-22.5%、55.2%-13.0%之间。且此浓度范围内药物对人结肠癌Lovo细胞增殖的抑制明显低于对内皮细胞的抑制,具有明显差异细胞毒作用,即抗血管生成效应。2.15～60μg/ml重楼醇提物、2～8μg/ml白头翁醇提物、2～8μg/ml汉防己甲素单药应用可明显抑制内皮细胞迁移,迁移的内皮细胞数随着药物浓度的增加而减少,相关系数r值分别为-0.933、-0.929、-0.933,P值分别为0.000、0.000、0.000;联合10μg/ml恩度时,相关系数r值分别为-0.904、-0.919、-0.943,P值分别为0.000、0.000、0.000,且联合组较单药组对内皮细胞的迁移抑制更加明显,差异有统计学意义。3.15～60μg/ml重楼醇提物、2～8μg/ml白头翁醇提物、2～8μg/ml汉防己甲素单药应用可明显抑制内皮细胞体外小管的形成,小管数目减少,不能相互连接成网状结构,而且管腔不完整,与对照组相比有显著性差异,P值均小于0.01;联合10μg/ml恩度时对小管形成的抑制较单药组明显,差异有统计学意义。4.60μg/ml重楼醇提物、8μg/ml白头翁醇提物、8μg/ml汉防己甲素单药作用于内皮细胞48h可明显诱导内皮细胞凋亡发生,凋亡率分别为25%、37.1%、20.8%;联合10μg/ml恩度时,凋亡率分别为79.3%、58.6%、60.4%,与单药组相比凋亡率增加。5.60μg/ml重楼醇提物、8μg/ml汉防己甲素单药及联合10μg/ml恩度作用于内皮细胞24h可阻滞细胞周期于G0-G1期,8μg/ml白头翁醇提物单药及联合10μg/ml恩度可阻滞细胞周期于G2-M期。6.15～60μg/ml重楼醇提物、2～8μg/ml白头翁醇提物、2～8μg/ml汉防己甲素单药应用及联合10μg/ml恩度时对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管具有明显的抑制作用,并与浓度呈正相关,随浓度增加抑制作用明显增加,且联合组抑制的鸡胚数增多。【结论】小剂量中药重楼、白头翁醇提物以及汉防己甲素在体内外具有抑制血管生成作用,联合恩度具有协同效应。