【摘 要】
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为了分离和克隆原杨(Populus euphratica)Na/H exchanger完整cDNA,以盐胁迫处理的胡杨叶为材料构建了cDNA文库.实验中应用固相合成方法,以NotI/OligodT为引物,在磁珠上依次完
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为了分离和克隆原杨(Populus euphratica)Na<+>/H<+> exchanger完整cDNA,以盐胁迫处理的胡杨叶为材料构建了cDNA文库.实验中应用固相合成方法,以NotI/OligodT<,15>为引物,在磁珠上依次完成cDNA双链的合成、衔接子连接及磷酸化,再用Not I酶将修饰好的双链cDNA从磁珠上切割下来.柱层析除去500bp以下cDNA片段及多余的衔接头后,将cDNA定向克隆到λExcell载体上.结果显示,文库的初始滴定为7.6×10<6>Pfu/ml,包装效价为1.24×10<7>重组体/ugDNA,随机挑选的重组噬菌体经酶切鉴定,均能切出约900bp的外源cDNA片段,说明盐胁迫下的胡杨叶片cDNA文库已成功构建.根据从大麦(Hordeum oulgare)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)中克隆的Na<+>/H<+> exchanger的保守区设计特异性引物,用3 RACE的方法,从胡杨中克隆到约200bp的cDNA片段,推测该片段可能是胡杨Na<+>/H<+> exchangeer cDNA的3末端,其序列与功能的分析正在进行中.
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