鸭肠炎病毒gC基因疫苗诱导BALB/c小鼠免疫发生的研究

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鸭病毒性肠炎(Duck viral enteritis, DVE)又称鸭瘟(Duck piague, DP)由鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus, DEV);引起的,发生于鸭、鹅及多种雁形目动物的一种的急性、高度接触性传染病。基因疫苗以其独特的优势在基因工程疫苗研究中备受关注。本研究对DEV gC的理论免疫原性和gC基因疫苗对BALB/c小鼠的免疫原性及其免疫佐剂等开展系列研究,获得以下结果:1.鸭肠炎病毒gC基因免疫原性理论预测:同源性分析显示DEV gC与MDV-1、MDV-2 gC的同源性最高和亲缘关系最近;功能预测显示DEV gC可能属于免疫反应基因范畴,具有细胞外膜蛋白功能和酶性质,但不属于任何一种酶类,进一步对其结构与功能预测发现21~54、48~68、160-200aa可能与肝素结合有关,29-110aa与gC阻碍备解素与C3b结合有关,168-225和254-332aa与gC与C3b结合有关;细胞表位的预测显示DEV gC存在丰富的T和B细胞表位,表明DEV gC可能具有良好免疫原性。2.壳聚糖作为pcDNA-DEV-gC疫苗递送载体:制备和生物学特性研究:壳聚糖/DEV gC基因疫苗复合物制备标准化,具有较高的重现性,包封率为95.6%±0.8,形态均一,呈球形,直径在50-80nm之间,4℃能够稳定保存,低质粒降解率,转染率较好,低细胞毒性。因此,壳聚糖是DEV gC基因疫苗安全有效递送载体。3.阳性脂质体作为pcDNA-DEV-gC疫苗递送载体:制备和生物学特性研究:阳性脂质体/DEV gC基因疫苗复合物制备标准化,具有较高的重现性,包封率为76.4%±0.8,形态均一,呈球形,直径在400-700nm之间,4℃能够稳定保存,低质粒降解率,转染率高,低细胞毒性。因此,阳性脂质体是DEV gC基因疫苗安全有效的递送载体。4.检测鼠抗DEV特异性血清IgG和肠道分泌IgA的间接ELISA方法的建立:两种间接ELISA方法的抗原包被浓度分别为0.5pg/ml和1μg/ml,一抗工作浓度分别为1:8和原液,酶标抗体工作浓度为1:5000和1:8000,一抗孵育温度和时间都为37℃1h,酶标抗体孵育温度和时间分别为37℃1h和37℃2h,底物作用时间都为40min,阴阳性临界值分别为0.259和0.297,具有良好的特异性和重复性,为基因疫苗的体液免疫和粘膜免疫检测提供了稳定的检测方法。5.鸭肠炎病毒gC基因疫苗诱导BALB/c小鼠免疫发生的研究:pcDNA-DEV-gC基因疫苗能够诱导小鼠产生一定程度的细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫。基因枪轰击和肌注途径诱导T淋巴细胞增殖、CD4+和CD8+T淋巴细胞免疫应答优于口服途径,基因枪轰击诱导体液免疫应答的能力较肌注和口服途径强,三种免疫途径中仅口服途径产生黏膜反应。基因枪轰击细胞和体液免疫应答具有一定的剂量相关性,而肌肉注射仅在细胞免疫方面。递送载体可显著提高机体的细胞免疫和粘膜免疫水平,其中阳性脂质体偏重细胞免疫,壳聚糖偏重粘膜免疫,具有良好的佐剂效应。与弱毒疫苗相比,基因疫苗诱导细胞免疫应答的能力优于弱毒疫苗,而弱毒疫苗诱导体液免疫的能力更强。
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