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第一部分 PRRX1在胃癌中的表达及临床意义 目的：研究胃癌中 PRRX1的表达与 EMT、临床病理特征、Wnt/β-catenin信号通路的关系。 方法： 1.免疫组织化学方法检测PRRX1、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin和β-catenin在125例人胃癌组织及其相应的正常胃粘膜组织中的表达，分析PRRX1表达与胃癌临床病理特征之间的关系，Spearman’s法分析PRRX1表达与N-cadherin、E-cadherin、Vimentin和β-catenin表达的相关性。 2. Real-Time PCR检测PRRX1、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin和β-catenin mRNA在胃癌细胞及胃正常粘膜细胞中的表达情况。 3. Western blot检测 RRXX1、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin和β-catenin蛋白在胃癌细胞及胃正常粘膜细胞中的表达情况。 结果： 1. PRRX1、EMT标记物（N-cadherin、E-cadherin、Vimentin）和Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin在胃癌组织及其相应的正常胃粘膜组织中差异表达（P<0.05）；PRRX1在胃癌中高表达，与胃癌患者的TNM分期和转移有关（P<0.05）；PRRX1的表达与EMT标记物（N-cadherin、E-cadherin、Vimentin）和 Wnt/β-catenin通路关键因子β-catenin的核表达有显着的相关性（P<0.05）。 2. PRRX1 mRNA在胃癌细胞 BGC823和 SGC7901低表达，在MNK28细胞高表达，而在正常胃粘膜细胞GES-1中未见表达（P<0.05）；N-cadherin、Vimentin和β-catenin mRNA在胃癌细胞 BGC823、SGC7901、MNK28的表达水平较正常胃粘膜细胞GES-1高（P<0.05），而E-cadherin相比较低（P<0.05）。 3. PRRX1蛋白在胃癌细胞BGC823和SGC7901低表达，MNK28细胞中高表达，正常胃粘膜细胞 GES-1中未见表达（ P<0.05）；N-cadherin、Vimentin和Wnt/β-catenin通路关键因子β-catenin蛋白在胃癌细胞BGC823、SGC7901、MNK28的表达水平高于正常胃粘膜细胞GES-1（P<0.05），而E-cadherin相比较低（P<0.05）。 结论：PRRX1胃癌中高表达，且与胃癌患者的TNM分期和转移正相关；在胃癌组织中，PRRX1与EMT、Wnt/β-catenin信号通路有显着正相关性。 第二部分 PRRX1对胃癌生物学特性的影响 目的：研究 PRRX1对胃癌细胞的增殖和转移的生物学特性的影响。 方法： PRRX1过表达慢病毒转染胃癌细胞 BGC823和 SGC7901， PRRX1干扰慢病毒转染胃癌细胞MNK28后： 1.使用MTT法检测PRRX1过表达或者干扰后胃癌细胞的生长情况。 2.采用软琼脂克隆实验检测 PRRX1过表达或者干扰后胃癌细胞的克隆形成情况。 3.运用Transwell实验检测PRRX1过表达或者干扰后胃癌细胞的迁移和侵袭能力。 4.建立胃癌细胞的裸鼠皮下成瘤模型，观察PRRX1过表达或者干扰后胃癌细胞的裸鼠皮下瘤生长的情况。 结果： 1.与对照组相比，PRRX1过表达后的胃癌细胞BGC823和SGC7901的增殖能力明显增强（P<0.05）；干扰PRRX1表达后的胃癌细胞MNK28的增殖能力显着减弱（P<0.05）。 2. PRRX1过表达后的胃癌细胞BGC823和 SGC7901的软琼脂克隆形成能力较对照组显着增加（P<0.05）；干扰PRRX1表达后的胃癌细胞MNK28的软琼脂克隆形成能力较对照组显着减少（P<0.05）。 3.过表达PRRX1可以明显增加胃癌细胞BGC823和SGC7901迁移、侵袭细胞数目（P<0.05）；干扰PRRX1显着减少了胃癌细胞MNK28迁移、侵袭的细胞数目（P<0.05）。 4. PRRX1过表达后，胃癌细胞BGC823和 SGC7901的皮下瘤平均体积增长明显快于对照组（P<0.05）；干扰 PRRX1表达的 MNK28细胞瘤体生长抑制。 结论：PRRX1能够促进胃癌细胞的生长增殖，提高胃癌细胞软琼脂克隆的形成，增强胃癌细胞的转移能力，并促进胃癌细胞皮下瘤的生长。 第三部分PRRX1通过Wnt/β-catenin通路调控胃癌EMT的实验研究 目的：研究胃癌细胞中PRRX1对EMT及Wnt/β-catenin通路的影响。 方法： PRRX1过表达慢病毒转染胃癌细胞 BGC823和 SGC7901， PRRX1干扰慢病毒转染胃癌细胞MNK28后： 1.采用 Real-Time PCR检测 PRRX1、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin以及β-catenin、c-Myc的 mRNA表达情况；Western blot检测PRRX1、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、c-Myc和β-catenin蛋白以及胞核中β-catenin蛋白表达水平的变化。 2.运用细胞免疫荧光检测N-cadherin、E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况以及β-catenin蛋白的表达及定位情况。 3.组织免疫化学检测裸鼠皮下瘤中的 PRRX1、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin和β-catenin表达情况。 4. Wnt/β-catenin通路抑制剂 XAV-939作用胃癌细胞后，通过Transwell法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力的变化情况。 5. Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV-939作用胃癌细胞后，Real-Time和Western blot检测检测β-catenin、c-Myc、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin及PRRX1的表达变化，同时，Western blot也检测β-catenin蛋白在胞核中的表达情况。 结果： 1. PRRX1过表达后， BGC823和 SGC7901细胞中 PRRX1、N-cadherin和Vimentin表达较对照组明显增高，而E-cadherin显着下降（P<0.05），同时，β-catenin表达较对照组增加（P<0.05），β-catenin蛋白表达在胞核中明显增加（P<0.05）；干扰PRRX1表达后，MNK28细胞中 PRRX1、N-cadherin、Vimentin和 c-Myc表达较对照组显着降低（P<0.05），而E-cadherin明显升高（P<0.05），与此同时，β-catenin表达较对照组减少（ P<0.05），而胞核β-catenin蛋白表达明显减少（P<0.05）。 2. PRRX1过表达后，BGC823和 SGC7901细胞中 N-cadherin、Vimentin和β-catenin荧光量表达较对照组明显增强，而E-cadherin明显减弱，同时，β-catenin胞核内表达明显增多；干扰PRRX1表达后， MNK28细胞N-cadherin、Vimentin和β-catenin荧光量减弱，β-catenin胞核内表达明显减少，而E-cadherin明显增强。 3.干扰 PRRX1表达后的 MNK28细胞形成的裸鼠皮下瘤组织中PRRX1、N-cadherin、Vimentin和β-catenin表达减少，胞核中β-catenin明显减少，而E-cadherin表达升高。 4. MNK28细胞以及PRRX1过表达的胃癌细胞BGC823、SGC7901细胞的XAV-939组较DMSO空白对照组迁移和侵袭的细胞数目均显着减少（P<0.05）。 5.MNK28细胞以及 PRRX1过表达组的胃癌细胞 BGC823、SGC7901细胞在 XAV-939作用后，β-catenin、c-Myc、Vimentin、N-cadherin蛋白表达明显减少（P<0.05），β-catenin蛋白在胞核中表达下降（P<0.05），E-cadherin蛋白明显增加（P<0.05），而PRRX1蛋白表达无明显变化（P>0.05）。 结论：胃癌细胞过表达PRRX1后，出现EMT样的形态变化，并且伴有EMT标记物的相应改变；干扰PRRX1后，胃癌细胞出现逆EMT现象，这说明PRRX1可以诱导胃癌细胞发生EMT。同时，PRRX1影响Wnt/β-catenin通路相关因子的表达；PRRX1可以诱导胃癌细胞产生EMT及增强细胞迁移和侵袭能力，但抑制了Wnt/β-catenin通路后，可以逆转。PRRX1可以通过 Wnt/β-catenin信号通路调控 EMT，从而促进胃癌的转移。