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本文首先测定山羊和黄牛肠道黏膜βC加氧酶的Km值;然后采用析因法通过体外酶解,研究Fe2+、BHT、黄体素、游离脂肪酸以及胆酸盐对山羊和黄牛βC加氧酶活性影响;最后体外模拟山羊和黄牛肠道内环境,采用正交试验设计,综合分析内环境因素对βC加氧酶的活性影响,并对肠道内环境控制类胡萝卜素的吸收代谢作了初探。 Fe2+、BHT和黄体素对βC加氧酶活性影响 1) 山羊肠道黏膜βC加氧酶Km和Vmax分别为14.41 μM和0.62;黄牛Km和Vmax分别为1.31 μM和0.08。2) 在0.5~2mM浓度范围内,Fe2+显著提高βC加氧酶活性,促进β-胡萝卜素向VA转化。且1mM为最适浓度,超过此浓度,酶活反而受到抑制,VA的量呈下降趋势。3) 与对照比,2μM BHT显著抑制酶活(P<0.05),浓度达5μM时,产物VA的量约为对照组的一半。4) 反应体系中βC与黄体素的质量比为2:1,1:1,1:2时,极显著抑制酶活(P<0.01),并且随黄体素比例增加,产物VA量持续下降。只有黄体素存在时,产生的VA很少,几乎没有,验证了黄体素无VA原的活性。 游离脂肪酸对山羊和黄牛βC加氧酶活性影响 1) 亚油酸、亚麻酸和油酸促进山羊和黄牛βC加氧酶的作用极显著高于其它种类的脂肪酸(P<0.01),三者两两差异不显著(P<0.05)。2) 10mg油酸、8mg亚油酸和亚麻酸极显著提高山羊和黄牛βC加氧酶活性,且浓度和酶活成正相关。 胆酸盐对山羊和黄牛βC加氧酶活性影响 1) 胆酸盐提高山羊肠道βC加氧酶活性,其促进作用从高到低依次为甘氨脱氧胆盐>甘氨胆酸盐>鹅脱氧胆酸盐>牛磺脱氧胆盐>牛磺胆酸盐 2) 4mM甘氨脱氧胆盐、甘氨胆盐和鹅脱氧胆盐显著抑制黄牛βC加氧酶活性;牛磺脱氧胆酸盐和牛磺胆盐显著促进酶活性(P<0.01),且牛磺脱氧胆盐作用显著优于牛磺胆酸盐(P<0.01)。3) 对山羊而言:与对照比较,甘氨胆酸盐、甘氨脱氧胆盐和鹅脱氧胆盐在4 mM~8 mM浓度范围内,显著提高了βC加氧酶活性(P<0.01);牛磺胆酸盐和牛磺脱氧胆酸盐在浓度达4 mM~10 mM之间提高酶活,最适浓度两者均为8 mM。4) 对黄牛而言:与对照比,牛磺胆酸盐在4 mM~10mM浓度范围内促进酶活,最适浓度为8mM,超过此浓度,反而起抑制作用;8mM牛磺脱氧胆盐组产生的VA量是对照组的2.3倍左右,浓度增加到10mM,VA的量呈现下降趋势,仍显著高于对照组(P<0.01)。 动物肠道内环境对βC加氧酶活性影响 1) 山羊肠道内环境影响βC加氧酶的活性因素主次顺序依次为:脂肪酸→胆酸盐→黄体素→Fe2+。2) 黄牛肠道内环境影响陈丽:山羊和黄牛肠道内环境对日C加氧酶影响研究日c加氧酶的活性因素主次顺序依次为:胆酸盐*黄体素一脂肪酸,Fe’‘。关键词:山羊;黄牛;肠道内环境;pc加氧酶