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目的子宫内膜容受性是指子宫内膜能够接受胚胎着床的能力,容受性良好则囊胚易于着床,妊娠率高。针对PCOS患者促排卵后子宫内膜容受性差,目前主要采用的是补佳乐(雌激素),增加子宫内膜厚度的方法,但临床效果不甚理想,中医药治疗疗效确切,能明显减少西药的不良反应。PCOS子宫内膜发育异常且伴有ER、PR、Integrinav?3、HOXA10的表达异常,本课题在前期研究的基础上,从促排卵后子宫内膜容受性着手,研究电针联合补肾活血中药对PCOS促排卵后子宫内膜各不同时期(促排卵后、围着床期、妊娠早期)容受性的影响,对临床防治多囊卵巢综合征、提高妊娠率及降低流产率具有十分重要的理论意义和实用价值。方法清洁级21日龄雌性大鼠450只(计划310只,由于实验期间动物有脱落补充),于24日龄,40只皮下注射麻油作为正常对照组(G),模型大鼠皮下注射DHEA6mg/100g体重/天+0.2ml注射麻油,连续注射20天。将造模成功的270只大鼠采用随机数字表法分为模型组(M)、克罗米芬组(CC)、克罗米芬+补佳乐组(CC+PVG)、克罗米芬+电针组(CC+A)、克罗米芬+补肾活血方组(CC+M)、克罗米芬+针药结合组(CC+M+A),每组45只。在80日龄,除正常组外,每组取大鼠5只,行阴道涂片观察动情周期、测血清证实造模成功。余下每组均于80日龄起进行干预,克罗米芬灌胃:10mg/100g灌胃,每只大鼠(1ml/100g)灌胃;补佳乐0.104mg/kg,每只大鼠(1ml/100g)灌胃;中药颗粒按1:1比例,将12g溶入30ml蒸馏水,每只大鼠(1ml/100g)灌胃,均连续灌胃5天。电针治疗:选取关元、双侧三阴交、子宫穴,接HANS-200电针治疗仪,连续波,频率2Hz,强度为1m A,通电20min,1次/d,连续治疗5天。5天治疗后,每组取10只做阴道涂片检查,发现角化细胞提示排卵,次日处死大鼠取血清,摘取双侧卵巢子宫,解剖后观察情况并称重。左侧子宫用作HE染色,右侧子宫用做蛋白和基因检测。余下每组30只实验大鼠均于下午6:00与雄鼠按2:1比例合笼,次日早8:00查阴道涂片,以发现精虫者记为妊娠第一天(D1),每组于妊娠D4、D5、D8下午4:00分别处死10只,摘取双侧子宫,记录孕鼠数及胚泡着床数。光镜下观察子宫内膜形态及微血管密度,电镜下观察饱饮突。采用SP免疫组化、RT-PCR、Western-blotting检测ER、PR、整合素av?3、HOXA10的蛋白表达。结果1.促排卵后排卵率及妊娠情况比较正常组排卵正常,CC+M+A组接近正常组排卵率。且着床率为88%,接近正常组100%。2.促排卵后子宫内膜容受性影响2.1子宫内膜形态比较:CC+M+A组与正常组无明显差异(P?0.05),与其它几组在腺体及腺腔等效直径、面积及子宫内膜厚度比较,有统计学意义(P?0.05)2.2.RT-PCR结果:各组ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 m RNA比较,正常组与CC+M+A组比较明显升高(P?0.05),CC+M、CC+A、CC+M+A三组之间无明显差异(P?0.05)。ER及Integrinav?3m RNA比较,CC+M、CC+A、CC+M+A、CC+PVG四组之间无明显差异(P?0.05);四组均较模型组、CC组升高,有统计学意义。PR及HOXA10m RNA比较:CC+M+A与CC+PVG组、模型组、CC组比较升高,有统计学意义(P?0.05)。2.3 Western-blotting结果:ER、PR、HOXA10比较基本同RT-PCR结果。Integrinav?3比较,CC+M+A与CC+PVG组、模型组、CC组比较升高,有统计学意义(P?0.05)2.4电针联合补肾活血方对促排卵后子宫内膜容受性影响:子宫内膜形态上,CC+M+A组与正常组无差异,提示子宫内膜容受性好,通过蛋白及基因测定,CC+M+A组较正常组在ER、PR、HOXA10、Integrinav?3表达稍低,但较其它几组表达显著升高。3.大鼠妊娠D4、D5天(围着床期)子宫内膜容受性指标比较3.1.子宫饱饮突情况比较:正常组与CC+M+A组之间无明显差异(P?0.05),子宫内膜饱饮突发育完全较高。3.2.免疫组化比较:ER、PR、HOXA10、Integrinav?3在正常组与CC+M+A组中均有阳性表达,二者间无明显差异。3.3.RT-PCR结果:各组ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 m RNA比较,CC+M+A组与正常组之间无明显差异(P?0.05)。各组ER、PRm RNA比较:与CC+A、CC+M组比较明显升高(P?0.05),而与CC+PVG、CC、模型组比较有显著差异(P?0.01);各组Integrinav?3、HOXA10m RNA比较:与CC+M、CC+A、CC组比较明显升高(P?0.05),与CC+PVG、模型组有显著升高(P?0.01)。3.4.Western-blotting结果:各组ER、PR、HOXA10、Integrinav?3蛋白比较,CC+M+A组与正常组之间无明显差异(P?0.05)。ER、PR蛋白比较:与CC+A组比较明显升高(P?0.05),与CC+M、CC+PVG、CC、模型组比较有显著差异(P?0.01)。Integrinav?3、HOXA10蛋白比较:与CC+M、CC+A组比较明显升高(P?0.05),与CC+PVG、CC、模型组显著升高(P?0.01)。3.5电针联合补肾活血方对大鼠围着床期子宫内膜容受性影响:子宫饱饮突情况比较,正常组与CC+M+A组之间无明显差异(P?0.05),饱饮突发育完全较高,提示子宫内膜容受良好。通过SP免疫组化、RT-PCR、Western-blotting检测,CC+M+A组与正常组均在ER、PR、HOXA10、Integrinav?3上较高表达,且较其它几组表达显著升高。4.大鼠妊娠D8天(妊娠早期)子宫内膜容受性指标比较4.1.免疫组化比较:CC+M+A组与正常组,二者间无明显差异。在ER、PR、HOXA10、Integrinav?3上,与CC+A组、CC+M组、CC+PVG组,三组比较有差异(P?0.05);与CC组、模型组比较有统计学意义(P?0.01)。4.2.RT-PCR结果:各组ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 m RNA比较,正常组与CC+M+A组之间无明显差异(P?0.05),与CC+PVG、CC、模型组有显著升高(P?0.01)。ERm RNA比较,与CC+A组比较明显升高(P?0.05)。各组Integrinav?3m RNA比较,与CC+A、CC+M组比较明显升高(P?0.05)。各组PRm RNA、HOXA10m RNA比较,与CC+M比较明显升高(P?0.05)。4.3.Western-blotting结果:各组ER、Integrinav?3、HOXA10蛋白比较,CC+M+A组与正常组比较,明显升高(P?0.05);与CC+M、CC+A、CC+PVG、CC、模型组比较有显著差异(P?0.01)。各组PR蛋白比较:CC+M+A组与正常组之间无明显差异(P?0.05),但与CC+M组比较明显升高(P?0.05),且与CC+A、CC+PVG、CC、模型组比较有显著差异(P?0.01)。4.4电针联合补肾活血方对大鼠妊娠早期子宫内膜容受性影响:SP免疫组化,CC+M+A组与正常组比较有较高表达,通过RT-PCR、Western-blotting检测,CC+M+A组在ER、PR、HOXA10、Integrinav?3上较高表达,且较其它几组表达显著升高。结论在促排卵后、围着床期、妊娠早期,电针联合补肾活血方能显著改善CC促排卵治疗导致的子宫内膜容受性不良状态。补肾活血中药、电针在提高子宫内膜容受性方面较西药补佳乐优势明显,不仅改善子宫内膜容受性,且通过改善子宫内膜容受性的同时改善PCOS大鼠的排卵率,这与电针联合补肾活血中药对PCOS大鼠激素水平(FSH、LH)的调节有关,电针联合补肾活血中药提高PCOS大鼠妊娠率可能是通过上调子宫内膜组织雌激素受体、孕激素受体、整合素avβ3、同源盒基因A10及其m RNA水平来实现的。