曲古抑菌素A对小鼠核移植后早期胚胎发育的影响

• 作 者: 纪红
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 胚胎发育 曲古抑菌素 卵母细胞 乙酰化组蛋白

目的:
1、观察昆明和B6D2F1小鼠核移植早期胚胎发育,研究不同卵龄昆明小鼠MII期卵母细胞电融合时电刺激对卵母细胞激活的影响。
2、观察曲古抑菌素A(TSA)对重构胚早期发育的影响。
3、观察乙酰化组蛋白H3-K9在TSA处理组和未处理组重构胚、孤雌胚胎表达。
方法:
1、采用融合时的参数下,比较注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后13、16 h卵母细胞经体外培养(IVC)4h的激活率。
2、采用昆明和F1小鼠卵母细胞作为受体,分别采用昆明小鼠胎儿成纤维细胞和F1小鼠卵丘细胞作为核供体,进行核移植。
3、以昆明小鼠为实验模型,核移植得到的重构胚分为两组(TSA处理组和对照组),比较两组重构胚发育。
4、将胚胎经激活、培养10h后固定,免疫荧光染色,观察乙酰化组蛋白H3-K9,TSA处理组和未处理组重构胚、孤雌胚胎表达。
结果:
1、hCG注射后13h,16h MII期卵母细胞激活率分别是6.2％和29.5％,两者间差异有极显著性意义。
2、昆明小鼠重构胚融合率56.9％；2-细胞发育率28.7％；4-细胞发育率11.8％。F1小鼠共得重构胚50个,2-细胞发育率52％,囊胚发育率30％。
3、TSA药物处理与对照组的胚胎2-cell发育率为50％、36％和4-cell发育率为19.0％、19.1％,两组之间差异无显著性意义。
4、TSA处理组和未处理组重构胚中,乙酰化组蛋白H3-K9在胚胎核的边缘区域表达,孤雌胚胎是在胚胎核的全部区域表达。
结论:
1、注射hCG后13h卵母细胞为适宜的小鼠核移植的受体。
2、TSA处理融合法得到的重构胚10h后,没有提高KM小鼠的重构胚的2-细胞与4-细胞的发育率。
3、发育10h后,重构胚组蛋白H3-K9的乙酰化修饰异常。