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目的：观察大黄素在体外抑制人结肠癌细胞RKO、HT-29、Caco-2的增殖作用,并探讨其初步的机理。
方法：选择低、中、高三种分化程度的人结肠癌细胞RKO、HT-29、Caco-2,100、50、25、12.5μM大黄素处理三种细胞24、48、72小时后,采用四唑氮盐(MTT)比色法检测三种细胞的吸光度并计算生长抑制率,在光镜下观察三种细胞的形态学变化。采用流式细胞仪检测RKO细胞的凋亡百分率和细胞周期改变,透射电子显微镜观察RKO细胞经50μM大黄素处理前后的超微结构改变。
结果：在各个作用时段内,随着大黄素浓度的升高,三种细胞的各组的吸光度明显减弱。100、50、25μM大黄素处理RKO细胞24小时后,各组细胞的吸光度与对照组相比明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。
100μM大黄素处理HT-29细胞24小时后,细胞的吸光度与对照组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。100、50、25、12.5μM大黄素处理RKO细胞48小时后,各组细胞的吸光度与对照组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。
100、50、25μM大黄素处理HT-29细胞48小时后,各组细胞的吸光度与对照组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05),100μM大黄素处理Caco-2细胞48小时后,细胞的吸光度与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);100、50μM大黄素处理RKO细胞72小时后,两组细胞的吸光度与对照组相比减少且差异具有统计学差异(P<0.05)。100、50、25μM大黄素处理HT-29细胞72小时后,各组细胞的吸光度与对照组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。
100、50、25μM大黄素处理Caco-2细胞72小时后,各组细胞的吸光度与对照组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。光镜下,随大黄素浓度的升高不同分化程度的各实验组的细胞数量呈递减趋势,大黄素对RKO细胞的抑制作用最为明显。RKO细胞的凋亡百分率随大黄素浓度的升高呈递增趋势。在G峰左侧出现亚二倍体的凋亡细胞峰,且峰顶随大黄素的浓度升高而增高,凋亡百分率最高达11.01％；大黄素阻滞结肠癌RKO细胞的细胞周期于G0/G1期；电镜下50μM大黄素处理的RKO组中具有凋亡特征的细胞较正常对照组更为多见,表现为细胞表面微绒毛减少,体积缩小,胞浆浓缩,并形成凋亡小体。
结论：大黄素能在体外抑制RKO、HT-29、Caco-2细胞的增殖,且对RKO、Caco-2细胞的抑制作用呈明显的剂量依赖性,对HT-29细胞的抑制作用呈明显的时间、剂量依赖性。大黄素对RKO细胞的抑制作用强于HT-29、Caco-2细胞。大黄素抑制RKO细胞体外增殖作用的机理可能与诱导RKO细胞凋亡和阻滞RKO细胞周期于G0/G1期有关。