PA6/PVA复合纳米纤维制备及其固定化酶研究

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静电纺丝的原理是使带电荷的高分子溶液或熔体在静电场中流动与变形,然后经溶剂蒸发或熔体冷却而固化,于是得到纤维状物质。静电纺纤维制品主要呈无纺布状,具有极大的比表面积,以及优良的力学性能和热电传导性,在过滤防护材料、增强复合材料、生物医学如药物释放等方面有广阔的应用前景。现在,静电纺丝已成为制备超细纤维和纳米级纤维的重要方法。酶分子的高级结构对外界因素非常敏感,如对热、强酸、强碱、有机溶剂等不够稳定,而且,从反应体系中回收自由酶较为困难,易造成产物污染使得产物提纯困难,从而大大提高了生产成本等。酶的固定化能在一定程度上解决上述问题。与自由酶相比,固定化酶的稳定性增加、可以反复使用、易与反应物分开,有利于产物的分离纯化,从而提高产品质量。固定化酶在生物医学、生物工程、环境保护等领域中具有广阔的研究和应用前景。构建性能优良的载体往往是酶固定化成功与否的关键。本课题以甲酸为溶剂,用静电纺丝法制备PA6/PVA复合纳米纤维膜,并将其用作酶的固定化载体。通过对PA6/PVA混纺比及纺丝工艺参数的调节制备出了形态良好的PA6/PVA复合纳米纤维膜,采用红外光谱和表面张力仪对其相容性和亲水性进行表征和分析,并采用扫描电镜对纳米纤维膜的形貌进行分析。采用环氧氯丙烷法活化纳米纤维膜,用共价结合法固定纤维素酶,并探讨了酶固定化条件对固定化酶活性的影响。最后对自由酶和固定化酶的酶学性质进行比较。结论如下:(1)在纺丝电压为19kv、纺丝距离为20cm、丝液流量为0.2ml/h的条件下,PA6与PVA的最佳混纺比为12%:4%。在此混纺比下,纤维具有良好的形貌。PA6和PVA是一对相容性良好的高聚物。PA6/PVA复合纳米纤维相对于纯PA6、PVA纳米纤维来说,其成膜性和亲水性得到了改善,有效地克服了PVA纯纺纳米纤维在水溶液体系中过度溶胀的问题,具有良好的形态稳定性。(2)采用的活化条件为:以NaOH和二甲亚砜DMSO为混合溶剂,活化温度为60℃,活化时间为4h,pH值为10,NaOH浓度为1.0mol/L。在此条件下活化纳米纤维膜材料。当加酶量为15mL、pH值为4.0及偶联时间为5h时,固定化酶比活力均达到最大。(3)固定化酶最适反应温度为65℃、最适反应pH值为4.0,米氏常数Km为0.7301mmol/L,最大反应速率Vmax为0.4529μmol/min,而自由酶的米氏常数Km为0.4592mmol/L,最大反应速率Vmax为0.5045μmol/min,说明酶被固定后其与底物的亲和力变弱,酶活性降低。固定化酶的热稳定性、重复使用稳定性和贮藏稳定性均得到提高。
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