论文部分内容阅读
【目的】通过采集青海省人民医院手术患者术后包虫标本,提取虫体组织中的线粒体DNA,扩增线粒体基因上的细胞色素氧化酶Ⅰ基因(Cox1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nad1)序列,获得的棘球属绦虫线粒体基因序列与其它不同种绦虫进行序列比较分析,进一步研究青海省两型棘球属绦虫的分类,系统发生及其起源。【方法】选用青海省人民医院2016-2017年手术切除的肝包虫患者大体标本,所有标本通过病理学检查确诊为囊型包虫病(CE)或泡型包虫病(AE)。使用DNA纯化回收试剂盒提取纯化DNA,并通过Genbank上棘球属绦虫的基因信息设计引物,使用PCR技术扩增线粒体DNA中的Cox1、Nad1基因并测序。扩增后的DNA用DNASP软件、MEGA7.0软件的邻接法(NJ)等分析方法测定棘球绦虫线粒体Cox1、Nad1基因的碱基组成、基因变异情况及其在物种进化中的地位。通过比较青海地区棘球属绦虫与其它绦虫基因差异,明确青海省两型棘球绦虫的基因变异情况,推测棘球属绦虫的分化时间,并构建绦虫系统进化发育树和分子钟模型。【结果】通过收集青海地区细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫,对其线粒体DNA上的Cox1和Nad1碱基序列的测定并构建进化树。发现细粒棘球绦虫均为G1基因型,多房棘球绦虫均为亚洲株,其中细粒棘球绦虫Cox1和Nad1测得的基因序列大小分别为1600bp和894bp,共有不同的基因序列7个和5个,变异位点为15处和7处;多房棘球绦虫Cox1和Nad1基因序列大小1608bp和894bp,共有不同的基因序列4个和1个,变异位点为7处和1处。通过对比棘球属绦虫与其它种属绦虫的碱基序列,发现两者碱基组成成分、单倍型多样性指数和核苷酸多样性指数趋势类似。将棘球属绦虫进行分子钟的分析,推测青海省细粒棘球绦虫起源于11.8万年前,多房棘球绦虫起源于7.9万年前。【结论】青海省细粒棘球绦虫的优势株为G1基因型,多房棘球绦虫优势株为亚洲株。通过与绦虫其它虫株对比,两者碱基组成成分类似。绦虫Cox1基因的单倍型多样性高于Nad1,说明Cox1基因的遗传多样性较为丰富。另外细粒棘球绦虫G1基因型和G3基因型、多房棘球绦虫亚洲株和北美株、欧洲株分歧时间较短,因此在生物学特征上有很多类似。