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第一部分:糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜血管的实验研究目的:本研究在建立实验性糖尿病大鼠模型的基础上,观察糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜血管形态的影响,对闭锁蛋白(Occludin)、封闭蛋白(Claudin)和水通道蛋白4(Aquaporin4, AQP4)表达的影响,探讨糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜血管的保护机制。方法:选用SPF级六周龄雄性SD大鼠24只,除正常组6只外,其余大鼠经腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotoein, STZ)(60mg/kg)诱导实验性糖尿病大鼠模型,注射72小时后尾尖静脉血糖连续3天≥16.7mmol/L者为糖尿病大鼠。造模成功后的糖尿病大鼠随机分为模型组6只,治疗组6只,对照组6只。治疗组和对照组大鼠在造模成功后即开始给药。其中,治疗组(炙黄芪、红参、茯苓、桂枝、丹参、三七粉、地龙等水煎,浓度为1g/m1)给药量为10g/(kg·d);对照组(多贝斯)给药量为250mg/(kg·d)。每隔2周监测大鼠体重、血糖变化。实验周期9个月。10%水合氯醛过量麻醉处死大鼠,摘取眼球,制备视网膜血管消化铺片,通过光镜、电镜观察糖尿病大鼠视网膜血管形态结构改变;应用免疫组织化学法染色检测Occludin、Claudin和AQP4在视网膜血管上的表达,经图像分析软件测量免疫组化的显色强度并进行定量分析。结果:(1)视网膜消化铺片PAS染色:与正常组相比,模型组大鼠毛细血管网排列紊乱,管径粗细不均,多根毛细血管扭聚成丛,形成毛细血管瘤;内皮细胞明显增生、核固缩,周细胞凋亡,可见影周细胞。与模型组比,治疗组大鼠毛细血管分布比较规则,管径粗细较均匀,周细胞丢失、内皮细胞增生不明显,未见影周细胞、毛细血管瘤,未见内皮细胞、周细胞凋亡。对照组与治疗组大致相同。(2)电镜观察:与正常组相比,模型组大鼠血管内皮细胞肿胀,有微绒毛样突起,突向管腔,管腔变窄;周细胞水肿,胞浆内出现较大的空泡,周细胞可退变甚至消失;基底膜明显增厚。治疗组大鼠病变明显较轻,内皮细胞和周细胞轻度水肿,基底膜增厚不明显。对照组和治疗组大致相同,内皮细胞和周细胞偶见肿胀,胞浆内细胞器形态基本正常,基底膜增厚不明显。 (3)内皮细胞、周细胞及内皮细胞和周细胞的比值计数:与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠内皮细胞明显增生,周细胞明显减少,内皮细胞周细胞比明显升高(P<0.05);与模型组相比,治疗组、对照组表达内皮细胞增生不明显,周细胞减少不显著,内皮细胞周细胞比明显减少(P<0.05);治疗组和模型组内皮细胞、周细胞、内皮细胞周细胞比表达无显著差异(P>0.05)。(4)Occludin在视网膜消化铺片上的表达结果:与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠视网膜Occludin阳性表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组、对照组表达明显增加(P<0.05);与对照组相比,治疗组表达明显增加(P<0.05)。(5)Claudin在视网膜消化铺片上的表达结果:与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠视网膜Claudin P日性表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组、对照组表达明显增加(P<0.05);与对照组相比,治疗组表达明显增加(P<0.05)。(6)AQP4在视网膜消化铺片上的表达结果:与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠视网膜血管上AQP4阳性表达值明显降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组、对照组表达明显增加(P<0.05);对照组与治疗组表达无显著差异(P>0.05)。结论:(1)实验性糖尿病大鼠的视网膜血管发生明显的病理损伤;(2)糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜血管具有一定的保护作用;(3)糖网1号方能增强糖尿病大鼠视网膜血管上Occludin、Claudin和AQP4的表达,减少血管渗漏,减轻紧密连接的损伤,维持视网膜的屏障功能,这可能是中药保护视网膜血管的机制之一。第二部分糖网1号方联合激光对糖尿病患者的临床观察目的:评估糖网1号方联合激光对糖尿病性黄斑水肿的临床疗效。方法:回顾性分析2010年1月到2014年7月来我科就诊的糖尿病黄斑水肿(diabetic macular edema,DME)者80例(128眼),其中治疗组49例(80眼)口服中药糖网1号方联合激光治疗,对照组31例(48眼)行激光联合复方血栓通治疗,观察治疗前后视力、黄斑中,心凹厚度、微血管瘤数、渗漏面积变化。结果:治疗1月后和3月后,治疗组和对照组均可有效提高DME患者视力(P<0.05),但二者对视力改善程度无显著差异(P>0.05);治疗组和对照组在治疗1月后对微血管瘤数目变化无显著差异(P>0.05),3月后治疗组优于对照组(P<0.05);与对照组相比,治疗组黄斑中心凹厚度、渗漏面积在治疗1月后和治疗3月后均优于对照组(P<0.05)。结论:激光联合中药糖网1号方治疗糖尿病黄斑水肿,在消除黄斑水肿程度,缩小渗漏面积方面优于激光联合复方血栓通治疗。