论文部分内容阅读
目的：慢性粒细胞白血病 (CML ) 具有特征性染色体异常，它是由t(9；22)(q34；q11)染色体易位形成的，被命名为Ph染色体。在分子水平形成BCR/ABL融合基因，该基因编码的融合蛋白BCR/ABL具有强酪氨酸激酶活性，可以异常激活多条细胞信号转导途径。如RAS/MFAPK，PI3K/AKT，C-Myc，JAK/STAT途径等。其中，信号转导和转录活化因子5(STAT5)在CML细胞恶性转化中起重要作用。STAT活化后形成二聚体，转位至胞核，与DNA上的特定调节序列结合，调节基因转录。SHP2属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员之一，是含有Src同源区2的胞质PTP，是一种由PTPN11基因编码的非受体依赖型酪氨酸蛋白磷酸酶，应用基因敲除技术敲除小鼠胚胎干细胞SHP2基因后，引起包括红系、粒系和淋巴系等多个造血细胞系统发育障碍，表明SHP2在正常造血细胞生长与发育过程中起着十分重要的作用。有研究表明，SHP2能作用于多条信号传导通路的多个位点，另外SHP2也可以与多种信号传导中间媒介体相结合，如Grb2，JAK2，Gab1，Gab2等。Bcr/abl融合基因编码的P210蛋白在造血细胞内不仅能与Shp2结合，还能使其磷酸化。酪氨酸激酶抑制剂STI571 (格列为)已经被作为特效的CML靶向治疗药物，但由于BCR/ABL突变，mRNA 转录水平上调等原因而有耐药现象产生，因此有必要寻找其它靶分子来作为联合用药的靶点。本研究旨在探讨STAT5、SHP2基因在慢性粒细胞白血病患者中的表达情况，同时进一步了解酪氨酸激酶抑制剂对K562细胞的影响及STAT5在慢性粒细胞白血病发病机制中的作用，为慢性粒细胞白血病的联合靶向治疗提供新的依据。
方法：本研究对象为30例慢性粒细胞白血病(CML)患者。慢性期患者25例，加速急变期患者5例。10例正常人作为正常对照。采用半定量逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)方法对患者和正常对照的骨髓进行 BCR/ABL，STAT5A,STAT5B,SHP2mRNA水平的检测。通过细胞培养的方法对白血病细胞株K562进行传代培养，并用不同浓度的酪氨酸激酶抑制剂STI571对其进行处理，用MTT法观察细胞活性及生长状况，并绘制生长曲线：用实时定量PCR检测BCR/ABL mRNA水平，同时用RT-PCR方法检测实验组与对照组STAT5A，STAT5B，SHP2，MCL-1，BAX基因的mRNA的表达水平。
结论：
1.在CML患者原代白血病细胞中STAT5A，STAT5B，SHP2基因表达水平明显高于正常对照组，说明STAT5，SHP2基因与CIVIL的发生有一定的关系。
2.酪氨酸激酶抑制剂可减少K562细胞株中BCR/ABLmRNA的表达，降低STAT5，SHP2，MCL-1 mRNA的表达，BAX表达增加。考虑BCR/ABL融合蛋白在导致细胞的恶性转化中是通过激活JAK/STAT通路和通过抑制细胞的凋亡实现的。