人角膜上皮干细胞体外培养体系的建立、生物学鉴定及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其增殖影响的研究

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建立人角膜上皮干细胞体外培养体系,并探讨体外培养的人角膜干细胞的鉴定方法;在此基础上,进一步观察碱性成纤维细胞生长因子对干细胞增殖的影响,为角膜上皮干细胞移植奠定基础.将一同标本来源的角膜缘组织分别置于DMEM培养液(钙离子浓度过1.8mM)和低钙培养液MEM(钙离子浓度0.1mM),用倒置显微镜观察并比较其生长特性;将同一标本来源的角膜缘镜观察并比较其生长特性;制备饲细胞,与传代细胞共同培养;用无钙培养基进行组织块培养;通过刷掉基底层以上细胞,获得角膜缘上皮层基底层细胞;有倒置相关显微镜、扫描电镜和透射电镜、间接免疫荧光组织化学和细胞化学方法,以及细胞固定染色方法,从生长特性、光镜的形态特征、超微结构特点以及免疫细胞化学特性方面进行鉴别;通过计算机图象分析系统定量分析不同浓度的bFGF(1~100mg/ml)对干细胞增殖的影响.
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