【摘 要】
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本研究旨在探讨脂多糖诱导的纹状体长时程炎症对大鼠行为、黑质纹状体中小胶质细胞的激活及多巴胺能神经元的影响,研究选用雄性8周龄SD大鼠,经脑立体定位仪注射脂多糖(LPS)入双
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本研究旨在探讨脂多糖诱导的纹状体长时程炎症对大鼠行为、黑质纹状体中小胶质细胞的激活及多巴胺能神经元的影响,研究选用雄性8周龄SD大鼠,经脑立体定位仪注射脂多糖(LPS)入双侧纹状体,对照组注射同等体积生理盐水。记录用药前、用药后1w、2w、4w、8w、16w、24w各时间点30分钟行为,经动物行为轨迹分析软件计算30分钟运动距离和平均运动速度,酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学观察黑质多巴胺能神经元损害变化,小胶质特异性标记物OX-42免疫组织化学染色观察黑质小胶质细胞形态及数量变化,高效液相色谱电化学方法检测纹状体内多巴胺(DA)及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)的含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测脑源性神经营养因子(BDNF)水平改变。Western blot进一步准确测得OX-42定量变化。
本研究结果显示,实验组大鼠在给药后运动呈进行性下降,24w时实验组与对照组相比,运动距离及平均运动速度均减少约50﹪。实验组动物纹状体及黑质小胶质细胞胞体变大,突起缩短增粗,呈现阿米巴样激活状态,且激活的小胶质细胞数量随给药时间延长渐进增多,通过Westem blot对OX-42定量分析,实验组大鼠黑质内OX-42蛋白含量在第8周、第16周、第24周时明显高于对照组,达到对照组的2.51倍、3.80倍、4.02倍,有显著的统计学意义,对照组OX-42含量在8w、16w、24w均无明显变化。TH免疫组织化学结果显示黑质多巴胺能神经元随给药时间延长进行性减少,在24w时实验组黑质TH阳性神经元数量较对照组减少了近70﹪。HPLC结果显示8w、16w、24w实验组纹状体多巴胺含量较对照组减少分别为35﹪、56﹪、68﹪,与TH免疫组织化学结果一致。酶联免疫吸附实验检测结果显示脑源性神经营养因子在LPS给药组明显高于对照组,8周、16周时约为对照组的两倍,24周时略高于对照组。因此,得出纹状体炎症通过小胶质细胞的激活,可致黑质多巴胺能神经元变性死亡,并伴有神经营养因子的变化,且这一过程呈现出慢性进行性的改变。
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